La inducción de la MAP quinasa fosfatasa-2 (MKP-2) modula negativamente la activación por AMPc del gen CYP11A1 en células de Leydig.

GOMEZ NV; MORI SEQUEIROS GARCÍA MM; GOROSTIZAGA AB; ACQUIER AB; GONZALEZ-CALVAR S; MENDEZ CF; PAZ C

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LVI Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En células esteroidogénicas la activación de MAP quinasas (MAPKs) por las hormonas tróficas lleva a la inducción y/o activación de proteínas necesarias para la esteroidogénesis. Estos eventos son modulados indirectamente por las MAPK fosfatasas (MKPs), como MKP-2, dada la capacidad de estas enzimas de inactivar a las MAPKs. Previamente demostramos que en células de Leydig MA-10, LH/hCG y AMPc promueven la acumulación de la proteína MKP-2 por mecanismos transcripcionales y post-traduccionales, y que la sobre-expresión de esta enzima reduce la activación por AMPc del promotor del gen CYP11A1 (gen que codifica para la enzima P450scc). En este trabajo nos propusimos confirmar -mediante el bloqueo de la expresión de la proteína endógena- el papel regulatorio de MKP-2 en la inducción del gen CYP11A1 y determinar los efectos de las modificaciones post-traduccionales inducidas por AMPc sobre la vida media de esa proteína, utilizando células de Leydig MA-10. Se empleó un gen reportero (CYP11A1-luciferasa) para evaluar la actividad del promotor del gen en estudio y un shRNAi específico para bloquear la expresión de MKP-2. Se determinó que el 8Br-AMPc aumenta la actividad del promotor (P<0,001) y que el bloqueo de la expresión de MKP-2 por el shRNAi aumenta este efecto: AMPc=0,74±0,07 vs. AMPc+RNAi=0,96±0,07 (actividad relativa de luciferasa, P<0,05). Para analizar si las modificaciones post-traduccionales modifican la vida media de MKP-2 se emplearon células transfectadas para la expresión de flag-MKP-2 y se evaluaron los niveles de la proteína por Western blot (anticuerpo anti-flag). Experimentos de pulse-chase mostraron que la estimulación con 8Br-AMPc incrementa la vida media de la proteína recombinante. En síntesis se concluye que MKP-2 se estabiliza por modificaciones post-traduccionales promovidas por AMPc y que la inducción de esta fosfatasa modula negativamente la acción hormonal sobre la expresión del gen CYP11A1.