Expansión de células linfocitos T regulatorias regulatorios en ratones portadores de adenocarcinomas mamarios LM3

M.A.MORENO AYALA ; S.KLEIN; E. BAL DE KIER JOFFE; A. SEILICOVICH; M. CANDOLFI

Congreso; LVII Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2012

En este trabajo caracterizamos el modelo de carcinoma mamario LM3 con el objeto de establecer si la inoculación de células LM3se observa induce una expansión de células T regulatorias (Tregs), como ha sido descripto en pacientes portadoras de carcinomas mamarios. En ratones Balb/c inmunocompetentes inoculados con células LM3 (2x105, s.c.), los tumores fueron detectables desde el día 12 post-inyección y crecieron progresivamente con un tiempo de duplicación de ~7d (volumen40d: 854mm3±154). Éstos presentaron un fenotipo agresivo, caracterizado por la invasión del tejido adiposo de la glándula mamaria y el desarrollo de metástasis pulmonares. Las células inmunes presentes en el tumor fueron identificadas mediante inmunofluorescencia indirecta. Observamos que aunque las células inmunes (CD45+) accedieron al sitio del tumor, no ingresaron al microambiente tumoral, quedando la mayoría retenida en la periferia del tumor y alrededor de vasos sanguíneos. Si bien detectamos escasas células T CD8+ y células presentadoras de antígeno (MCHII+), observamos abundantes Tregs (Foxp3+) en los bordes y el interior del tumor. Luego purificamos las células inmunes intratumorales (gradiente de Percoll) y mediante citometría de flujo determinamos que ~10% de las células inmunes intratumorales eran células T CD4+. Sin embargo, el 30-40% de estas células T fueron identificadas como Tregs (CD45+/CD4+/CD25+). Para determinar si la presencia del tumor LM3 genera una expansión de Tregs periféricas, como ha sido descripto en pacientes portadoras de carcinomas mamarios, cuantificamos las Tregs esplénicas en ratones portadores de tumor vs ratones normales por citometría de flujo. Aunque el porcentaje de células CD4+ total fue similar en ambos grupos (control: 15.8%±1.1; LM3: 14.2±1.2), el número de Tregs fue mucho mayor en el bazo de ratones portadores de tumor (control: 184x103±25; LM3: 735x103±122; p