INVESTIGADORES
PODESTA Ernesto Jorge
congresos y reuniones científicas
Título:
MAP QUINASA FOSFATASA-1 (MKP-1): FOSFORILACIÓN Y ESTABILIZACIÓN POR ACCIÓN DE HCG Y SU PAPEL EN LA INDUCCIÓN MEDIADA POR HCG/ERKS DE NUR77, UN FACTOR NECESARIO PARA LA TRANSCRIPCIÓN DE STAR
Autor/es:
. BRION L.1; GÓMEZ N.2; DUARTE A.3; PODEROSO .4; GOROSTIZAGA A.5; PODESTÁ E.6; PAZ C
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
En células de Leydig MA-10 el AMPc incrementa los niveles
del ARNm de MKP-1 e induce modificaciones post-traduccionales
que estabilizan la proteína. Además, en estas células MKP-1 impide
la inducción de StAR por AMPc. Teniendo en cuenta que en
células de Leydig LH/hCG promueven la activación de ERK1/2 vía
PKA, nos propusimos determinar si la estabilización de MKP-1 por
hCG involucra la fosforilación de esta fosfatasa por PKA/ERKs y
si la inducción de MKP-1 regula la expresión de NUR77, factor
de transcripción que interviene en la inducción de StAR y otros
genes relacionados con la esteroidogénesis. Células MA-10 que
sobre-expresan transitoriamente la proteína recombinante Flag-
MKP-1 fueron incubadas con 32Pi y luego estimuladas con hCG
o AMPc. Demostramos que hCG/AMPc promueven la fosforilación
de MKP-1, analizada por inmunoprecipitación, SDS-PAGE y
autorradiografía. PD98059 (inhibidor de MEK1/2) inhibe totalmente
este efecto pero sólo reduce parcialmente la acumulación de la
proteína mediada por AMPc, como se determina por Western blot.
Esto sugiere que la estabilización de la proteína depende, al
menos en parte, de su fosforilación. Con el fin de conocer el
mecanismo por el cual MKP-1 reduce la expresión de StAR, analizamos
si esta fosfatasa afecta la expresión del factor inducible
por hCG/AMPc, NUR77. Mediante experimentos de cotransfección,
analizamos el efecto de la sobre-expresión transitoria
de MKP-1 sobre la actividad del promotor de NUR77, determinada
evaluando la actividad de un gen reportero (luciferasa).
Comprobamos que el AMPc incrementa la actividad del promotor
(expresada en unidades relativas de luciferasa) y que MKP-1
inhibe este efecto (AMPc=2,12±0,26 vs. AMPc+MKP-1=0,85±0,08;
P<0,001), al igual que PD. Se concluye que la estabilización de
MKP-1 por hCG/AMPc es parcialmente dependiente de la
fosforilación por ERK1/2 y que MKP-1 inhibe la inducción de
NUR77 por AMPc, efecto que estaría involucrado en la inhibición
de la expresión de StAR por MKP-1.
