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54 MEDICINA - Volumen 68 - (Supl. II), 2008MEDICINA - Volumen 68 - (Supl. II), 2008 jantes al control. En grupos (B) y (C) disminuyeron significativamente: el número total y medio de mitocondrias y crestas mitocondriales e incremento la matriz intermembranosa y tumefacción turbia respecto al control(p<0,01). Estas lesiones se relacionaron con una disminución significativa en la actividad de complejos mitocondriales(I a IV) (p<0.001) cuando se compararon respecto al control y al grupo sin tratar. Vit E revertiría el estrés oxidativo presente en aterogenesis quizás por aumento de los factores antioxidantes sobre los prooxidantes (NO) y a nivel mitocondrial revertiría las lesiones por regulación de la dinámica de membranas mitocondriales. 0004 (622) LA INMUNOFILINA FKBP51 SE LOCALIZA EN LA MITOCONDRIA Y POSEE ACCIÓN ANTIAPOPTOTICAL. I Gallo 1, E Bal de Kier Joffé 2, G Piwien Pilipuk 1, M D Galigniana 1 3 1Fundación Instituto Leloir/IIBBA-CONICET; 2Instituto de Oncología A. H. Roffo; 3Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA <lgallo@leloir.org.ar> Las inmunofilinas (IMMs) de alto PM FKBP51 y FKBP52 forman complejos con receptores esteroidales vía su interacción con hsp90. Previamente demostramos que el retrotransporte de GR depende de FKBP52, la que forma un puente molecular con dineína. En cambio, poco se sabe sobre la función de FKBP51, por lo que en este estudio analizamos sus propiedades. Imágenes por microscopía confocal mostraron que FKBP51 es mayoritariamente mitocondrial (mt-51), lo que fue confirmado por colocalización con marcadores mitocondriales (MitoTracker, Cyt c, COX-IV y Tom20), microscopía electrónica y fraccionamiento celular. La señal de mt-51 fue abolida por un iRNA específico En la organela, mt-51 existe libre y asociada con mt-GR, con el que co-inmunoprecipita. Diversos estímulos translocaron a mt-51 al núcleo (ROS, luz UV, TNFa, LPS, etc.) por un mecanismo que mostró ser dependiente de la despolarización de la membrana mitocondrial y cuya cinética fue similar a la salida de Cyt c y a la translocación nuclear de mt-hsp70. La sobreexpresión de HSF1 provocó la concentración nuclear de mt-51, mientras que la IMM es siempre mitocondrial en células HSF1-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica.I Gallo 1, E Bal de Kier Joffé 2, G Piwien Pilipuk 1, M D Galigniana 1 3 1Fundación Instituto Leloir/IIBBA-CONICET; 2Instituto de Oncología A. H. Roffo; 3Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA <lgallo@leloir.org.ar> Las inmunofilinas (IMMs) de alto PM FKBP51 y FKBP52 forman complejos con receptores esteroidales vía su interacción con hsp90. Previamente demostramos que el retrotransporte de GR depende de FKBP52, la que forma un puente molecular con dineína. En cambio, poco se sabe sobre la función de FKBP51, por lo que en este estudio analizamos sus propiedades. Imágenes por microscopía confocal mostraron que FKBP51 es mayoritariamente mitocondrial (mt-51), lo que fue confirmado por colocalización con marcadores mitocondriales (MitoTracker, Cyt c, COX-IV y Tom20), microscopía electrónica y fraccionamiento celular. La señal de mt-51 fue abolida por un iRNA específico En la organela, mt-51 existe libre y asociada con mt-GR, con el que co-inmunoprecipita. Diversos estímulos translocaron a mt-51 al núcleo (ROS, luz UV, TNFa, LPS, etc.) por un mecanismo que mostró ser dependiente de la despolarización de la membrana mitocondrial y cuya cinética fue similar a la salida de Cyt c y a la translocación nuclear de mt-hsp70. La sobreexpresión de HSF1 provocó la concentración nuclear de mt-51, mientras que la IMM es siempre mitocondrial en células HSF1-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica.1, E Bal de Kier Joffé 2, G Piwien Pilipuk 1, M D Galigniana 1 3 1Fundación Instituto Leloir/IIBBA-CONICET; 2Instituto de Oncología A. H. Roffo; 3Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA <lgallo@leloir.org.ar> Las inmunofilinas (IMMs) de alto PM FKBP51 y FKBP52 forman complejos con receptores esteroidales vía su interacción con hsp90. Previamente demostramos que el retrotransporte de GR depende de FKBP52, la que forma un puente molecular con dineína. En cambio, poco se sabe sobre la función de FKBP51, por lo que en este estudio analizamos sus propiedades. Imágenes por microscopía confocal mostraron que FKBP51 es mayoritariamente mitocondrial (mt-51), lo que fue confirmado por colocalización con marcadores mitocondriales (MitoTracker, Cyt c, COX-IV y Tom20), microscopía electrónica y fraccionamiento celular. La señal de mt-51 fue abolida por un iRNA específico En la organela, mt-51 existe libre y asociada con mt-GR, con el que co-inmunoprecipita. Diversos estímulos translocaron a mt-51 al núcleo (ROS, luz UV, TNFa, LPS, etc.) por un mecanismo que mostró ser dependiente de la despolarización de la membrana mitocondrial y cuya cinética fue similar a la salida de Cyt c y a la translocación nuclear de mt-hsp70. La sobreexpresión de HSF1 provocó la concentración nuclear de mt-51, mientras que la IMM es siempre mitocondrial en células HSF1-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica.1 3 1Fundación Instituto Leloir/IIBBA-CONICET; 2Instituto de Oncología A. H. Roffo; 3Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA <lgallo@leloir.org.ar> Las inmunofilinas (IMMs) de alto PM FKBP51 y FKBP52 forman complejos con receptores esteroidales vía su interacción con hsp90. Previamente demostramos que el retrotransporte de GR depende de FKBP52, la que forma un puente molecular con dineína. En cambio, poco se sabe sobre la función de FKBP51, por lo que en este estudio analizamos sus propiedades. Imágenes por microscopía confocal mostraron que FKBP51 es mayoritariamente mitocondrial (mt-51), lo que fue confirmado por colocalización con marcadores mitocondriales (MitoTracker, Cyt c, COX-IV y Tom20), microscopía electrónica y fraccionamiento celular. La señal de mt-51 fue abolida por un iRNA específico En la organela, mt-51 existe libre y asociada con mt-GR, con el que co-inmunoprecipita. Diversos estímulos translocaron a mt-51 al núcleo (ROS, luz UV, TNFa, LPS, etc.) por un mecanismo que mostró ser dependiente de la despolarización de la membrana mitocondrial y cuya cinética fue similar a la salida de Cyt c y a la translocación nuclear de mt-hsp70. La sobreexpresión de HSF1 provocó la concentración nuclear de mt-51, mientras que la IMM es siempre mitocondrial en células HSF1-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica.Fundación Instituto Leloir/IIBBA-CONICET; 2Instituto de Oncología A. H. Roffo; 3Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA <lgallo@leloir.org.ar> Las inmunofilinas (IMMs) de alto PM FKBP51 y FKBP52 forman complejos con receptores esteroidales vía su interacción con hsp90. Previamente demostramos que el retrotransporte de GR depende de FKBP52, la que forma un puente molecular con dineína. En cambio, poco se sabe sobre la función de FKBP51, por lo que en este estudio analizamos sus propiedades. Imágenes por microscopía confocal mostraron que FKBP51 es mayoritariamente mitocondrial (mt-51), lo que fue confirmado por colocalización con marcadores mitocondriales (MitoTracker, Cyt c, COX-IV y Tom20), microscopía electrónica y fraccionamiento celular. La señal de mt-51 fue abolida por un iRNA específico En la organela, mt-51 existe libre y asociada con mt-GR, con el que co-inmunoprecipita. Diversos estímulos translocaron a mt-51 al núcleo (ROS, luz UV, TNFa, LPS, etc.) por un mecanismo que mostró ser dependiente de la despolarización de la membrana mitocondrial y cuya cinética fue similar a la salida de Cyt c y a la translocación nuclear de mt-hsp70. La sobreexpresión de HSF1 provocó la concentración nuclear de mt-51, mientras que la IMM es siempre mitocondrial en células HSF1-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica.3Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA <lgallo@leloir.org.ar> Las inmunofilinas (IMMs) de alto PM FKBP51 y FKBP52 forman complejos con receptores esteroidales vía su interacción con hsp90. Previamente demostramos que el retrotransporte de GR depende de FKBP52, la que forma un puente molecular con dineína. En cambio, poco se sabe sobre la función de FKBP51, por lo que en este estudio analizamos sus propiedades. Imágenes por microscopía confocal mostraron que FKBP51 es mayoritariamente mitocondrial (mt-51), lo que fue confirmado por colocalización con marcadores mitocondriales (MitoTracker, Cyt c, COX-IV y Tom20), microscopía electrónica y fraccionamiento celular. La señal de mt-51 fue abolida por un iRNA específico En la organela, mt-51 existe libre y asociada con mt-GR, con el que co-inmunoprecipita. Diversos estímulos translocaron a mt-51 al núcleo (ROS, luz UV, TNFa, LPS, etc.) por un mecanismo que mostró ser dependiente de la despolarización de la membrana mitocondrial y cuya cinética fue similar a la salida de Cyt c y a la translocación nuclear de mt-hsp70. La sobreexpresión de HSF1 provocó la concentración nuclear de mt-51, mientras que la IMM es siempre mitocondrial en células HSF1-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica.a, LPS, etc.) por un mecanismo que mostró ser dependiente de la despolarización de la membrana mitocondrial y cuya cinética fue similar a la salida de Cyt c y a la translocación nuclear de mt-hsp70. La sobreexpresión de HSF1 provocó la concentración nuclear de mt-51, mientras que la IMM es siempre mitocondrial en células HSF1-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica.-/-. La sobreexpresión de FKBP51 incrementó la sobrevida celular frente a diversos tipos de injurias, mientras que su knock-down incrementó la muerte por apoptosis (evidenciada por condensación nuclear, fragmentación del DNA, activación de caspasas, tinción con anexina V, etc). Diversos tipos de células tumorales mostraron elevada expresión de FKBP51 concentrada constitutivamente en el núcleo, en particular, en los nucleolos colocalizando con nucleofosmina y nucleolina. Este reclutamiento de la IMM al componente fibrilar denso y granular del nucleolo se corresponde con acumulación nucleolar de rRNAs, tal como se evidenció por incorporación de BrUTP. En resumen, FKBP51 es una proteína mitocondrial, abundante en células tumorales donde se concentra en el nucleolo de manera dependiente de HSF1 y que posee acción antiapoptótica. 0005 (628) UN MECANISMO NOVEL DE INDUCCIÓN DE COX-2 EN LA REGULACIÓN DEL FENOTIPO AGRESIVO EN CÁNCER DE MAMA: PARTICIPACIÓN SECUENCIAL Y OBLIGATORIA DE LA ACIL-COA SINTETASA ACS4, EL ACIDO ARAQUIDONICO (AA) INTRAMITOCONDRIAL Y SUS PRODUCTOS LIPOXIGENADOS. P M Maloberti1, A Duarte1, U Orlando1, C Karles1, F Cornejo Maciel1, A F Castillo1, C Paz1, A Solano1, M E Pasqualini2, E J Podestá1 1IIMHNO, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, UBA; 21ra Cat. Biol. Cel. Embr. His., IBCFCM- UNC <malobertipm@hotmail.com> La enzima cicloxigenasa-2 (COX-2) es la principal isoforma sugerida como participante en la patogénesis de malignidad, principalmente en cáncer de colon y mama. En los últimos años también ha surgido la participación de las lipoxigenasas (LOX) en la regulación de la proliferación y apoptosis en la patología tumoral, particularmente LOX- 5 y 12. Previamente se ha demostrado que ACS4 también está involucrada en el cáncer hepatocelular y de colon. El mecanismo propuesto en estas patologías es la disminución de la apoptosis por reducción de AA libre. Hemos demostrado previamente que ACS4, también participa en el fenotipo agresivo en cáncer de mama. La sobrexpresión de ACS4 está involucrada en una mayor proliferación, invasión y migración celular y menor apoptosis. Se midió apoptosis por la técnica de tunel y por la proteína apoptótica BAX por Western blots. En el presente trabajo confirmamos la participación de ACS4 en el fenotipo agresivo del cáncer de mama por obtención de líneas celulares estables inducibles que sobrexpresan ACS4, al igual que las líneas naturalmente agresivas. ACS4 en estas líneas está 18 ± 2 veces mas expresada (X ± SD n=4 p< 0.01) que en las líneas de origen. Además, demostramos por HPLC, que el contenido de los productos 5-HETE, 12-HETE y 15-HETE están aumentados 70, 5 y 2 veces respectivamente en la línea agresiva MDA-MB-231 comparado con la no agresiva MCF-7. La inhibición en la expresión de ACS4 en la línea MDA-MB-231 disminuye el contenido de 5-, 12- y 15-HETE a los valores de la linea MCF-7. La sobrexpresión de ACS4 produce un incremento (0.12 ± 0.03 vs 0.54 ± 0.06 unidades arbitarias, mock vs ACS4 p< 0.05,) en la expresión de COX-2 medida por Western blot, que es abolido en presencia de inhibidores de las lipoxigenasas. Estos Resultados muestran por primera vez la participación de ACS4, el AA intramitocondrial y sus productos lipoxigenados como inductores de COX-2 y como participantes obligatorios en la agresividad en el cáncer de mama.P M Maloberti1, A Duarte1, U Orlando1, C Karles1, F Cornejo Maciel1, A F Castillo1, C Paz1, A Solano1, M E Pasqualini2, E J Podestá1 1IIMHNO, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, UBA; 21ra Cat. Biol. Cel. Embr. His., IBCFCM- UNC <malobertipm@hotmail.com> La enzima cicloxigenasa-2 (COX-2) es la principal isoforma sugerida como participante en la patogénesis de malignidad, principalmente en cáncer de colon y mama. En los últimos años también ha surgido la participación de las lipoxigenasas (LOX) en la regulación de la proliferación y apoptosis en la patología tumoral, particularmente LOX- 5 y 12. Previamente se ha demostrado que ACS4 también está involucrada en el cáncer hepatocelular y de colon. El mecanismo propuesto en estas patologías es la disminución de la apoptosis por reducción de AA libre. Hemos demostrado previamente que ACS4, también participa en el fenotipo agresivo en cáncer de mama. La sobrexpresión de ACS4 está involucrada en una mayor proliferación, invasión y migración celular y menor apoptosis. Se midió apoptosis por la técnica de tunel y por la proteína apoptótica BAX por Western blots. En el presente trabajo confirmamos la participación de ACS4 en el fenotipo agresivo del cáncer de mama por obtención de líneas celulares estables inducibles que sobrexpresan ACS4, al igual que las líneas naturalmente agresivas. ACS4 en estas líneas está 18 ± 2 veces mas expresada (X ± SD n=4 p< 0.01) que en las líneas de origen. Además, demostramos por HPLC, que el contenido de los productos 5-HETE, 12-HETE y 15-HETE están aumentados 70, 5 y 2 veces respectivamente en la línea agresiva MDA-MB-231 comparado con la no agresiva MCF-7. La inhibición en la expresión de ACS4 en la línea MDA-MB-231 disminuye el contenido de 5-, 12- y 15-HETE a los valores de la linea MCF-7. La sobrexpresión de ACS4 produce un incremento (0.12 ± 0.03 vs 0.54 ± 0.06 unidades arbitarias, mock vs ACS4 p< 0.05,) en la expresión de COX-2 medida por Western blot, que es abolido en presencia de inhibidores de las lipoxigenasas. Estos Resultados muestran por primera vez la participación de ACS4, el AA intramitocondrial y sus productos lipoxigenados como inductores de COX-2 y como participantes obligatorios en la agresividad en el cáncer de mama.1, U Orlando1, C Karles1, F Cornejo Maciel1, A F Castillo1, C Paz1, A Solano1, M E Pasqualini2, E J Podestá1 1IIMHNO, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, UBA; 21ra Cat. Biol. Cel. Embr. His., IBCFCM- UNC <malobertipm@hotmail.com> La enzima cicloxigenasa-2 (COX-2) es la principal isoforma sugerida como participante en la patogénesis de malignidad, principalmente en cáncer de colon y mama. En los últimos años también ha surgido la participación de las lipoxigenasas (LOX) en la regulación de la proliferación y apoptosis en la patología tumoral, particularmente LOX- 5 y 12. Previamente se ha demostrado que ACS4 también está involucrada en el cáncer hepatocelular y de colon. El mecanismo propuesto en estas patologías es la disminución de la apoptosis por reducción de AA libre. Hemos demostrado previamente que ACS4, también participa en el fenotipo agresivo en cáncer de mama. La sobrexpresión de ACS4 está involucrada en una mayor proliferación, invasión y migración celular y menor apoptosis. Se midió apoptosis por la técnica de tunel y por la proteína apoptótica BAX por Western blots. En el presente trabajo confirmamos la participación de ACS4 en el fenotipo agresivo del cáncer de mama por obtención de líneas celulares estables inducibles que sobrexpresan ACS4, al igual que las líneas naturalmente agresivas. ACS4 en estas líneas está 18 ± 2 veces mas expresada (X ± SD n=4 p< 0.01) que en las líneas de origen. Además, demostramos por HPLC, que el contenido de los productos 5-HETE, 12-HETE y 15-HETE están aumentados 70, 5 y 2 veces respectivamente en la línea agresiva MDA-MB-231 comparado con la no agresiva MCF-7. La inhibición en la expresión de ACS4 en la línea MDA-MB-231 disminuye el contenido de 5-, 12- y 15-HETE a los valores de la linea MCF-7. La sobrexpresión de ACS4 produce un incremento (0.12 ± 0.03 vs 0.54 ± 0.06 unidades arbitarias, mock vs ACS4 p< 0.05,) en la expresión de COX-2 medida por Western blot, que es abolido en presencia de inhibidores de las lipoxigenasas. Estos Resultados muestran por primera vez la participación de ACS4, el AA intramitocondrial y sus productos lipoxigenados como inductores de COX-2 y como participantes obligatorios en la agresividad en el cáncer de mama.1, A Solano1, M E Pasqualini2, E J Podestá1 1IIMHNO, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, UBA; 21ra Cat. Biol. Cel. Embr. His., IBCFCM- UNC <malobertipm@hotmail.com> La enzima cicloxigenasa-2 (COX-2) es la principal isoforma sugerida como participante en la patogénesis de malignidad, principalmente en cáncer de colon y mama. En los últimos años también ha surgido la participación de las lipoxigenasas (LOX) en la regulación de la proliferación y apoptosis en la patología tumoral, particularmente LOX- 5 y 12. Previamente se ha demostrado que ACS4 también está involucrada en el cáncer hepatocelular y de colon. El mecanismo propuesto en estas patologías es la disminución de la apoptosis por reducción de AA libre. Hemos demostrado previamente que ACS4, también participa en el fenotipo agresivo en cáncer de mama. La sobrexpresión de ACS4 está involucrada en una mayor proliferación, invasión y migración celular y menor apoptosis. Se midió apoptosis por la técnica de tunel y por la proteína apoptótica BAX por Western blots. En el presente trabajo confirmamos la participación de ACS4 en el fenotipo agresivo del cáncer de mama por obtención de líneas celulares estables inducibles que sobrexpresan ACS4, al igual que las líneas naturalmente agresivas. ACS4 en estas líneas está 18 ± 2 veces mas expresada (X ± SD n=4 p< 0.01) que en las líneas de origen. Además, demostramos por HPLC, que el contenido de los productos 5-HETE, 12-HETE y 15-HETE están aumentados 70, 5 y 2 veces respectivamente en la línea agresiva MDA-MB-231 comparado con la no agresiva MCF-7. La inhibición en la expresión de ACS4 en la línea MDA-MB-231 disminuye el contenido de 5-, 12- y 15-HETE a los valores de la linea MCF-7. La sobrexpresión de ACS4 produce un incremento (0.12 ± 0.03 vs 0.54 ± 0.06 unidades arbitarias, mock vs ACS4 p< 0.05,) en la expresión de COX-2 medida por Western blot, que es abolido en presencia de inhibidores de las lipoxigenasas. Estos Resultados muestran por primera vez la participación de ACS4, el AA intramitocondrial y sus productos lipoxigenados como inductores de COX-2 y como participantes obligatorios en la agresividad en el cáncer de mama.IIMHNO, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, UBA; 21ra Cat. Biol. Cel. Embr. His., IBCFCM- UNC <malobertipm@hotmail.com> La enzima cicloxigenasa-2 (COX-2) es la principal isoforma sugerida como participante en la patogénesis de malignidad, principalmente en cáncer de colon y mama. En los últimos años también ha surgido la participación de las lipoxigenasas (LOX) en la regulación de la proliferación y apoptosis en la patología tumoral, particularmente LOX- 5 y 12. Previamente se ha demostrado que ACS4 también está involucrada en el cáncer hepatocelular y de colon. El mecanismo propuesto en estas patologías es la disminución de la apoptosis por reducción de AA libre. Hemos demostrado previamente que ACS4, también participa en el fenotipo agresivo en cáncer de mama. La sobrexpresión de ACS4 está involucrada en una mayor proliferación, invasión y migración celular y menor apoptosis. Se midió apoptosis por la técnica de tunel y por la proteína apoptótica BAX por Western blots. En el presente trabajo confirmamos la participación de ACS4 en el fenotipo agresivo del cáncer de mama por obtención de líneas celulares estables inducibles que sobrexpresan ACS4, al igual que las líneas naturalmente agresivas. ACS4 en estas líneas está 18 ± 2 veces mas expresada (X ± SD n=4 p< 0.01) que en las líneas de origen. Además, demostramos por HPLC, que el contenido de los productos 5-HETE, 12-HETE y 15-HETE están aumentados 70, 5 y 2 veces respectivamente en la línea agresiva MDA-MB-231 comparado con la no agresiva MCF-7. La inhibición en la expresión de ACS4 en la línea MDA-MB-231 disminuye el contenido de 5-, 12- y 15-HETE a los valores de la linea MCF-7. La sobrexpresión de ACS4 produce un incremento (0.12 ± 0.03 vs 0.54 ± 0.06 unidades arbitarias, mock vs ACS4 p< 0.05,) en la expresión de COX-2 medida por Western blot, que es abolido en presencia de inhibidores de las lipoxigenasas. Estos Resultados muestran por primera vez la participación de ACS4, el AA intramitocondrial y sus productos lipoxigenados como inductores de COX-2 y como participantes obligatorios en la agresividad en el cáncer de mama.21ra Cat. Biol. Cel. Embr. His., IBCFCM- UNC <malobertipm@hotmail.com> La enzima cicloxigenasa-2 (COX-2) es la principal isoforma sugerida como participante en la patogénesis de malignidad, principalmente en cáncer de colon y mama. En los últimos años también ha surgido la participación de las lipoxigenasas (LOX) en la regulación de la proliferación y apoptosis en la patología tumoral, particularmente LOX- 5 y 12. Previamente se ha demostrado que ACS4 también está involucrada en el cáncer hepatocelular y de colon. El mecanismo propuesto en estas patologías es la disminución de la apoptosis por reducción de AA libre. Hemos demostrado previamente que ACS4, también participa en el fenotipo agresivo en cáncer de mama. La sobrexpresión de ACS4 está involucrada en una mayor proliferación, invasión y migración celular y menor apoptosis. Se midió apoptosis por la técnica de tunel y por la proteína apoptótica BAX por Western blots. En el presente trabajo confirmamos la participación de ACS4 en el fenotipo agresivo del cáncer de mama por obtención de líneas celulares estables inducibles que sobrexpresan ACS4, al igual que las líneas naturalmente agresivas. ACS4 en estas líneas está 18 ± 2 veces mas expresada (X ± SD n=4 p< 0.01) que en las líneas de origen. Además, demostramos por HPLC, que el contenido de los productos 5-HETE, 12-HETE y 15-HETE están aumentados 70, 5 y 2 veces respectivamente en la línea agresiva MDA-MB-231 comparado con la no agresiva MCF-7. La inhibición en la expresión de ACS4 en la línea MDA-MB-231 disminuye el contenido de 5-, 12- y 15-HETE a los valores de la linea MCF-7. La sobrexpresión de ACS4 produce un incremento (0.12 ± 0.03 vs 0.54 ± 0.06 unidades arbitarias, mock vs ACS4 p< 0.05,) en la expresión de COX-2 medida por Western blot, que es abolido en presencia de inhibidores de las lipoxigenasas. Estos Resultados muestran por primera vez la participación de ACS4, el AA intramitocondrial y sus productos lipoxigenados como inductores de COX-2 y como participantes obligatorios en la agresividad en el cáncer de mama. PREMIO COSSIO 0006 (261) EFECTOS OPUESTOS DE PROGESTERONA E HISTAMINA A NIVEL TRANSCRIPCIONAL Y PROTEICO EN HUVEC. Y Powazniak 1, A C Kempfer 1, J C CalderazzoY Powazniak 1, A C Kempfer 1, J C Calderazzo 1, J H Paiva 1, L Keller 1, M A Lazzari 1 1CONICET, Academia Nacional de Medicina <yaninapowazniak@gmail.com> El VWF y la ADAMTS13 son sintetizados y almacenados en las células endoteliales. Se ha descripto en cultivos de Hela que la ADAMTS13 tiene actividad proteolítica en el retículo endoplasmático (RE) rugoso. La histamina (H) induce liberación del VWF de una forma Ca2+ dependiente a través de su interacción con el citocromo P450 en la membrana del RE liso. Esta unión puede ser inhibida por progesterona (P). En el endotelio vascular se han identificado receptores de P y secuencias en el ADN para la unión del complejo P-receptor. Se ha descrito que H puede regular la transcripción de distintos genes. Objetivo: Se evaluaron los cambios producidos por P e H en la síntesis y producción de VWF y ADAMTS13 en HUVEC. Metodologías: Cultivo de HUVEC. Tratamientos: las HUVEC se incubaron con 1μM P (niveles fisiológicos) y/o 100 μM H. Se estudiaron los niveles de mRNA de VWF y ADAMTS13 por real time PCR utilizando el sistema de detección de SYBR Green. Se identificaron y cuantificaron las proteínas intracelulares y liberadas de VWF y ADAMTS13 por SDS-PAGE e inmunotransferencia y ELISA. Análisis estadístico: ANOVA (p=0.05 significativo). Resultados: P no modifica los niveles de mRNA (p= 0.69), intracelulares (p= 0.61) y liberados (p= 0.65) de VWF, y de mRNA (p=0.74) y liberados (p=0.73) de ADAMTS13. Sin embargo, disminuye en 1.4 veces los valores de ADAMTS13 intracelular. Cuando se combina P y H se produce un aumento significativo de 6 (VWF) y 30 (ADAMTS13) veces en los niveles de ambos mensajeros, y de 16 veces en los niveles de ADAMTS13 liberada. Además, se observa una disminución significativa de 2 veces de VWF tanto intracelular como liberado. Discusión: El sinergismo transcripcional de P y H, podría afectar los niveles de proteína de VWF por la acción de ADAMTS13 en el RE rugoso. El antagonismo observado en la liberación de VWF, podría deberse a la inhibición por P en la unión de H con el citocromo P450., J H Paiva 1, L Keller 1, M A Lazzari 1 1CONICET, Academia Nacional de Medicina <yaninapowazniak@gmail.com> El VWF y la ADAMTS13 son sintetizados y almacenados en las células endoteliales. Se ha descripto en cultivos de Hela que la ADAMTS13 tiene actividad proteolítica en el retículo endoplasmático (RE) rugoso. La histamina (H) induce liberación del VWF de una forma Ca2+ dependiente a través de su interacción con el citocromo P450 en la membrana del RE liso. Esta unión puede ser inhibida por progesterona (P). En el endotelio vascular se han identificado receptores de P y secuencias en el ADN para la unión del complejo P-receptor. Se ha descrito que H puede regular la transcripción de distintos genes. Objetivo: Se evaluaron los cambios producidos por P e H en la síntesis y producción de VWF y ADAMTS13 en HUVEC. Metodologías: Cultivo de HUVEC. Tratamientos: las HUVEC se incubaron con 1μM P (niveles fisiológicos) y/o 100 μM H. Se estudiaron los niveles de mRNA de VWF y ADAMTS13 por real time PCR utilizando el sistema de detección de SYBR Green. Se identificaron y cuantificaron las proteínas intracelulares y liberadas de VWF y ADAMTS13 por SDS-PAGE e inmunotransferencia y ELISA. Análisis estadístico: ANOVA (p=0.05 significativo). Resultados: P no modifica los niveles de mRNA (p= 0.69), intracelulares (p= 0.61) y liberados (p= 0.65) de VWF, y de mRNA (p=0.74) y liberados (p=0.73) de ADAMTS13. Sin embargo, disminuye en 1.4 veces los valores de ADAMTS13 intracelular. Cuando se combina P y H se produce un aumento significativo de 6 (VWF) y 30 (ADAMTS13) veces en los niveles de ambos mensajeros, y de 16 veces en los niveles de ADAMTS13 liberada. Además, se observa una disminución significativa de 2 veces de VWF tanto intracelular como liberado. Discusión: El sinergismo transcripcional de P y H, podría afectar los niveles de proteína de VWF por la acción de ADAMTS13 en el RE rugoso. El antagonismo observado en la liberación de VWF, podría deberse a la inhibición por P en la unión de H con el citocromo P450.CONICET, Academia Nacional de Medicina <yaninapowazniak@gmail.com> El VWF y la ADAMTS13 son sintetizados y almacenados en las células endoteliales. Se ha descripto en cultivos de Hela que la ADAMTS13 tiene actividad proteolítica en el retículo endoplasmático (RE) rugoso. La histamina (H) induce liberación del VWF de una forma Ca2+ dependiente a través de su interacción con el citocromo P450 en la membrana del RE liso. Esta unión puede ser inhibida por progesterona (P). En el endotelio vascular se han identificado receptores de P y secuencias en el ADN para la unión del complejo P-receptor. Se ha descrito que H puede regular la transcripción de distintos genes. Objetivo: Se evaluaron los cambios producidos por P e H en la síntesis y producción de VWF y ADAMTS13 en HUVEC. Metodologías: Cultivo de HUVEC. Tratamientos: las HUVEC se incubaron con 1μM P (niveles fisiológicos) y/o 100 μM H. Se estudiaron los niveles de mRNA de VWF y ADAMTS13 por real time PCR utilizando el sistema de detección de SYBR Green. Se identificaron y cuantificaron las proteínas intracelulares y liberadas de VWF y ADAMTS13 por SDS-PAGE e inmunotransferencia y ELISA. Análisis estadístico: ANOVA (p=0.05 significativo). Resultados: P no modifica los niveles de mRNA (p= 0.69), intracelulares (p= 0.61) y liberados (p= 0.65) de VWF, y de mRNA (p=0.74) y liberados (p=0.73) de ADAMTS13. Sin embargo, disminuye en 1.4 veces los valores de ADAMTS13 intracelular. Cuando se combina P y H se produce un aumento significativo de 6 (VWF) y 30 (ADAMTS13) veces en los niveles de ambos mensajeros, y de 16 veces en los niveles de ADAMTS13 liberada. Además, se observa una disminución significativa de 2 veces de VWF tanto intracelular como liberado. Discusión: El sinergismo transcripcional de P y H, podría afectar los niveles de proteína de VWF por la acción de ADAMTS13 en el RE rugoso. El antagonismo observado en la liberación de VWF, podría deberse a la inhibición por P en la unión de H con el citocromo P450.2+ dependiente a través de su interacción con el citocromo P450 en la membrana del RE liso. Esta unión puede ser inhibida por progesterona (P). En el endotelio vascular se han identificado receptores de P y secuencias en el ADN para la unión del complejo P-receptor. Se ha descrito que H puede regular la transcripción de distintos genes. Objetivo: Se evaluaron los cambios producidos por P e H en la síntesis y producción de VWF y ADAMTS13 en HUVEC. Metodologías: Cultivo de HUVEC. Tratamientos: las HUVEC se incubaron con 1μM P (niveles fisiológicos) y/o 100 μM H. Se estudiaron los niveles de mRNA de VWF y ADAMTS13 por real time PCR utilizando el sistema de detección de SYBR Green. Se identificaron y cuantificaron las proteínas intracelulares y liberadas de VWF y ADAMTS13 por SDS-PAGE e inmunotransferencia y ELISA. Análisis estadístico: ANOVA (p=0.05 significativo). Resultados: P no modifica los niveles de mRNA (p= 0.69), intracelulares (p= 0.61) y liberados (p= 0.65) de VWF, y de mRNA (p=0.74) y liberados (p=0.73) de ADAMTS13. Sin embargo, disminuye en 1.4 veces los valores de ADAMTS13 intracelular. Cuando se combina P y H se produce un aumento significativo de 6 (VWF) y 30 (ADAMTS13) veces en los niveles de ambos mensajeros, y de 16 veces en los niveles de ADAMTS13 liberada. Además, se observa una disminución

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