EL ÓXIDO NÍTRICO INDUCE APOPTOSIS DE LAS CELULAS GERMINALES

BAÑUELOS C.; FASS M.; JARAZO-DIETRICH S.; LUSTIG L.; THEAS MS

Congreso; Reunion Anual SAIC-SAFIS-SAFE; 2013

Para estudiar los mecanismos involucrados en la apoptosis de las células germinales (CG) en respuesta a la inflamación testicular desarrollamos un modelo de orquitis autoinmune experimental (OAE) crónica en la rata. Previamente demostramos, mediante experimentos de co-cultivo, que el bloqueo de la enzima de síntesis del óxido nítrico (ON) en los macrófagos intersticiales provenientes del testículo (T) de ratas con OAE previene la apoptosis de las CG. El objetivo de este trabajo fue estudiar las vías involucradas en el fenómeno de apoptosis de las CG inducido por el ON. Fragmentos de T (FT) de ratas normales fueron incubados en medio DMEMF12 conteniendo o no un dador de ON, el DETA-Nonoato (D-NO, 2mM) en ausencia o presencia de un antioxidante la N-Acetil-L244 MEDICINA - Volumen 73 - (Supl. III), 2013 cisteína (NAC, 2.5mM), durante 18h. El D-NO indujo un aumento del% de túbulos seminíferos (TS) con CG apoptóticas (TUNEL) y la NAC previno dicho efecto (media±ESM, medio: 17.10±4.49%, D-NO: 38.36±3.46*, D-NO+NAC: 14.42±2.44^, NAC: 12.68±3.18, *p<0.001 vs medio; ^p<0.01 vs D-NO). El D-NO aumentó el contenido del citocromo c en el citosol (Western blot, Wb, p<0.05), el del fragmento de 37kDa de la caspasa 9 generado durante el proceso de activación (Wb, p<0.05) y su actividad enzimática (kit colorimétrico, media±ESM,% absorbancia vs medio, medio: 100.00±6.48, D-NO: 131,98±4.59, p<0.05). La NAC no impidió la salida del citocromo c al citosol y el clivaje de la caspasa 9. El balance del contenido de las proteínas pro (Bax) y anti-apoptótica (Bcl-2) de la familia de Bcl-2, en la mitocondria, fue similar en los FT incubados en presencia y ausencia de D-NO (p>0.05). En conclusión, demostramos que el ON induce apoptosis de las CG del testículo activando la vía mitocondrial y que este efecto es mediado por el estrés oxidativo. Dado que la NAC no previno la salida del citocromo c ni el procesamiento de la caspasa 9, especulamos que el efecto anti-apoptótico de la misma opera en un paso posterior de esta vía de señalización.