El antioxidante n-acetil-cisteína revierte el efecto del mono (2- etilhexil) ftalato (MEHP) sobre las uniones intercelulares en células de Sertoli

SOBARZO C.; NOGUEIRA DE MORAIS R; LUSTIG L.; DENDUCHIS B; SCHTEINGART H

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Anual de SAIC; 2013

El antioxidante N-acetil-cisteína revierte el efecto del Mono (2- etilhexi) ftalato (MEHP) sobre las uniones intercelulares en células de Sertoli (CS) Sobarzo, C, Nogueira de Morais R, Lustig L, Denduchis B, Schteingart H.   MEHP es un reconocido tóxico reproductivo que causa atrofia testicular y desbalance del estado redox celular. Previamente demostramos que el tratamiento de CS en cultivo con MEHP induce modificaciones en la expresión de las proteínas de unión intercelular y disminución en la concentración de Glutatión intracelular (GSH) (SAIC 2011). El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de un agente antioxidante (NAC) sobre las alteraciones inducidas por MEHP sobre las uniones intercelulares y el nivel de estrés oxidativo. Se aislaron CS de ratas de 20 días de edad y se cultivaron por 5 días en medio químicamente definido. Las CS controles o estimulados con MEHP (200 µM) fueron tratados con N-acetil-cisteína 1 mM (NAC) las últimas 24hs. Los niveles de GSH se determinaron por espectrofotometría. Los datos se expresan como % del control, media ± DS, n=6, * P<0.05 (Control: 344.7±21.8 pmolGSH/μgDNA). La localización y expresión de las proteínas de unión adherentes: N-cadherina (N-Cad), a y b-cateninas (Cat) y ZO-1; y de uniones de nexo: Conexina-43 (Cx-43) se determinaron por inmunofluorescencia (IF) y Western Blot (WB). Resultados: El tratamiento con NAC fue capaz de prevenir la disminución de GSH inducida por MEHP (GSH % vs control; MEHP: 24±5*; NAC: 188.1±16.5*; MEHP+NAC: 162.2±26*). Por IF se observó una deslocalización e incremento de la señal de las proteínas N-cad  y a-cat  de las membranas al citoplasma de las CS por MEHP. Por WB se observó un aumento significativo en la expresión de las proteínas N-cad,  α y b-cat y ZO-1 y una disminución significativa de Cx-43 en CS  tratadas con MEHP. La adición de NAC fue capaz de revertir el efecto del MEHP sobre N-cad y α-cat. Sin embargo  NAC no pudo revertir el efecto de MEHP sobre la  Cx-43 y ZO-1. En conclusión observamos en cultivos de células de Sertoli que el MEHP induce alteraciones en las uniones intercelulares que pueden ser revertidas por el uso de un antioxidante sugiriendo que éstas modificaciones podrían estar  mediadas, al menos en parte,  por un aumento del estrés oxidativo.