PARTICIPACIÓN DEL ÓXIDO NÍTRICO LIBERADO POR LOS MACRÓFAGOS TESTICULARES EN LA APOP¬TOSIS DE LAS CÉLULAS GERMINALES EN UN MODELO DE INFLAMACIÓN TESTICULAR EN LA RATA

JARAZO-DIETRICH S; FASS M; PÉREZ CV; LUSTIG L; THEAS MS

Mar del PLata

Congreso; LVI REUNION ANUAL SAIC; 2011

En el testículo normal, los linfomonocitos intersticiales, po­seen un fenotipo pro-inflamatorio atenuado que contribuye a proteger a las células germinales (CG) de un ataque inmuno­lógico. Sin embargo, en condiciones patológicas se activan y expresan un fenotipo pro-inflamatorio. Para estudiar los me­canismos involucrados en el daño testicular en respuesta a la inflamación, desarrollamos un modelo de inflamación crónica, la orquitis autoinmune experimental (OAE). Las características relevantes del cuadro son la presencia de un abundante infiltrado de macrófagos y linfocitos y apoptosis de las CG. Previamente en la OAE demostramos un aumento de la producción de óxido nítrico (ON) por los macrófagos testiculares (MT) concomitante con el inicio de la lesión testicular. El objetivo de este trabajo fue evaluar ex-vivo, la participación del ON liberado por los MT en la apoptosis de las CG. La OAE fue inducida por inmunización con antígenos espermáticos y adyuvantes (grupo experimental, E), además empleamos un grupo de ratas sin inmunizar (normales, N). Fragmentos de testículo (FT) de ratas N fueron co-cultivados con medio de cultivo solo o con MT aislados (“cell sorting”) de ratas E en presencia del inhibidor competitivo de la ON sintasa, L-NAME (2mM), o de su isómero inactivo, D-NAME (2mM). El % de túbulos seminíferos (TS) con CG apoptóticas (TUNEL) fue mayor en los FT co-cultivados con los MT vs medio y disminuyó en presencia de L-NAME (media±ESM, medio:4.08±1.40, MT+D-NAME:33.87±3.99 p<0.001; MT+L-NAME:19.29±3.09 p<0.05); en concordancia la producción de ON (técnica de Griess) por los MT fue disminuida por el L-NAME (MT+D-NAME:4.05μM, MT+L-NAME:2.60). El dador de ON (DETA-NONOato, 2mM) indujo in vitro apoptosis de las CG de FT de ratas N (media±ESM, medio:3.48±1.39 %TS con CG apoptóticas, DETA:25.47±7.42 p<0.01). En conclusión, demostramos que en la orquitis el ON generado por la activación de la ONS en los macrófagos del intersticio testicular induce apoptosis de las CG.