FAS LIGANDO SOLUBLE COMO MEDIADOR DE LA APOPTOSIS DE LAS CÉLULAS GERMINALES EN UN MODELO DE INFLAMACIÓN TESTICULAR

JACOBO P.; FASS M.; LUSTIG L.; THEAS M.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual SAIC; 2011

SAIC, SAFIS, AACYTAL

La orquitis autoinmune experimental (OAE) es un cuadro de inflamación crónica del testículo caracterizado por la presencia de un infiltrado intersticial linfomonocitario y apoptosis de las células germinales (CG). Demostramos previamente la expresión del receptor de muerte Fas en las CG apoptóticas y un aumento del número de linfocitos que expresan FasL en la membrana (FasLm). Nuestra hipótesis es que el FasLm podría liberarse en su forma soluble (FasLs), atravesar la barrera hemato-testicular (BHT) y unirse al Fas de las CG induciendo apoptosis. La OAE fue inducida por inmunización con antígenos espermáticos y adyu­vantes. Las ratas del grupo control (C) fueron inyectadas solo con adyuvantes y las del grupo normal (N) no recibieron tratamiento. Los animales fueron sacrificados a los 50 (OAE focal) y 80 (OAE severa, s) días de la primera inmunización. Por citometría de flujo detectamos en la OAE un aumento del porcentaje de macrófagos testiculares que expresan FasLm. El contenido testicular de FasLs (Western blot) evaluado en el fluido testicular fue mayor sólo en las ratas con OAEs (media±ESM, N:0,85±0.04, C:1.00±0.00, OAE:1,59±0.28, p<0.05 vs N y C). Para evaluar la permeabilidad de la BHT al FasLs, inyectamos por vía subalbugínea un FasLs unido al Strep-tag® y analizamos su localización por inmunofluo­rescencia, con un anticuerpo anti-Strep-tag®. En ratas con OAE, el FasLs-Strep-tag®, se localizó en la luz de los túbulos seminí­feros (TS), por dentro de la BHT (identificada por claudina 11). Mediante experimentos in vitro empleando un anticuerpo agonista (Ac-Fas) observamos que la activación del Fas indujo apoptosis de las CG [media±LC %CG-TUNEL+: medio solo: 25,46±(0.82-0.79), Ac-Fas(5μg/ml): 46.77±(1.05-1.05) n=8000-11000 células/grupo, p<0.001, Chi2 test]. Los resultados demuestran que el FasLs, posiblemente liberado por los linfomonocitos intersticiales, es capaz de atravesar la BHT e inducir apoptosis de las CG a través de su interacción con el receptor Fas.