El bloqueo del TNF-alfa liberado por los macrófagos testiculares previene la apoptosis de las células germinales de ratas con orquitis autoinmune experimental

THEAS M.S.; JARAZO-DIETRICH S.; JACOBO P.; LUSTIG L.

Mar del Plata

Congreso; LII Reunion Anual SAIC; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Soc. Arg. de Inmunolog¡§ªa

La orquitis autoinmune experimental (OAE) es un modelo de inflamación testicular caracterizado por la presencia de un infiltrado intersticial de macrófagos y linfocitos y apoptosis de las células germinales (CG). Dado que previamente demostramos que las CG apoptòticas expresan el receptor de TNF-alfa(TNFR) de tipo 1 y que el medio condicionado de macrófagos testiculares (MCMT) obtenido de ratas con OAE contiene TNF-alfa el objetivo de nuestro trabajo fue estudiar el efecto del MCMT sobre la apoptosis de las CG y determinar la participación del TNF-a en dicho proceso.La OAE fue inducida por inmunización activa con antígenos espermáticos y adyuvantes (grupo experimental, E), las ratas del grupo control (C) fueron inmunizadas sólo con adyuvantes. Los animales fueron sacrificados a los 30 días (d) (sin lesión), 50d (lesión focal) y 70d (lesión severa) de la primera inmunización. El MCMT obtenido de ratas E (MCMT/E) sacrificadas a los 50 y 70d indujo in vitro apoptosis de las CG (% de CG TUNEL+, MCMT 50d: C:20.23, E: 60.42***; MCMT 70d: C:18.34, E: 59.78***,p<0.001 vs respectivo C, test de Chi2).El contenido de TNF-alfa en el MCMT/E fue significativamente mayor a los 70d vs el MCMT/C (TNF-alfa pg/ml, MCMT 30d C:62.55+/-16.91, E:66.55+/-11.07; MCMT 50d C:83.00+/-6.34, E:100.89+/-17.28; MCMT 70d: C:68.23+/-19.53, E:111.45+/-8.79*, p<0.05, tes t de Student). Para evaluar si el TNF-alfa presente en el MCMT participa en la apoptosis de las CG, éste fue neutralizado in vitro empleando una proteína formada por el TNFR y la porción Fc de una IgG (Etanercept, ET). El ET revirtió el efecto apopt¨®tico del MCMT/E (% de CG TUNEL+, MCMT 70d. La orquitis autoinmune experimental (OAE) es un modelo de inflamaci¨®n testicular caracterizado por la presencia de un infiltrado intersticial de macrófagos y linfocitos y apoptosis de las céulas germinales (CG). Dado que previamente demostramos que las CG apoptóticas expresan el receptor de TNF- alfa (TNFR) de tipo 1 y que el medio condicionado de macr¨®fagos testiculares (MCMT) obtenido de ratas con OAE contiene TNF-alfa  el objetivo de nuestro trabajo fue estudiar el efecto del MCMT sobre la apoptosis de las CG y determinar la participación del TNF-alfa en dicho proceso.La OAE fue inducida por inmunización activa con antígenos espermáticos y adyuvantes (grupo experimental, E), las ratas del grupo control (C) fueron inmunizadas s¨®lo con adyuvantes. Losanimales fueron sacrificados a los 30 d¨ªas (d) (sin lesión), 50d (lesión focal) y 70d (lesión severa) de la primera inmunización. El MCMT obtenido de ratas E (MCMT/E) sacrificadas a los 50 y 70d indujo in vitro apoptosis de las CG (% de CG TUNEL+, MCMT50d: C:20.23, E: 60.42***; MCMT 70d: C:18.34, E: 59.78***,p<0.001 vs respectivo C, test de Chi2).El contenido de TNF- ¦Á  en el MCMT/E fue significativamente mayor a los 70d vs el MCMT/C (TNF- alfa pg/ml, MCMT 30d C:62.55+/-16.91, E:66.55+/-11.07; MCMT 50d C:83.00+/-6.34, E:100.89+/-17.28; MCMT 70d: C:68.23*/-19.53, E:111.45*/-8.79*, p<0.05, tes t de Student). Para evaluar si el TNF- alfa  presente en el MCMT participa en la apoptosis de las CG, ¨¦ste fue neutralizado in vitro empleando una prote¨ªna formada por el TNFR y la porci¨®n Fc de una IgG (Etanercept, ET). El ET revirtió el efecto apoptótico del MCMT/E (% de CG TUNEL+, MCMT 70dC:24.66, E:39.88, E+ET:22.58***, p<0.001 vs E, test de Chi2). Los resultados indican que los macròfagos testiculares producen factores solubles que inducen apoptosis de las CG, siendo el TNF-alfa un factor importante ya que el bloqueo del mismo previene la apoptosis de las CG durante la fase severa de la OAE.