El TNF-alfa como mediador de la apoptosis de las células germinales(CG) en la orquitis autoinmune experimental (OAE)

THEAS M.S.; RIVAL C.; GUAZZONE V.A.; JARAZO-DIETRICH S.; LUSTIG L.

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC, SAI, SAFE, SAB, SAN, SAF

EL TNF-ALFA COMO MEDIADOR DE LA APOPTOSIS DE LAS CÉLULAS GERMINALES (CG) EN LA ORQUITIS AUTOINMUNE EXPERIMENTAL (OAE).THEAS, MARÍA SUSANA ; RIVAL, CLAUDIA; GUAZZONE, VANESA ; JARAZO-DIETRICH, SABRINA; LUSTIG, LIVIA La OAE se caracteriza por la apoptosis de las CG y por un aumento del número de macrófagos y de linfocitos en el intersticio testicular. Previamente, hemos demostrado la expresión del TNFR1 y el aumento de la actividad de la caspasa 8 en las CG apoptóticas y la expresión del TNF-a en los macrófagos testiculares (MT). El objetivo de este trabajo fue determinar la participación del TNF-a y de los MT en la apoptosis de las CG y estudiar la activación de la vía apoptótica mitocondrial. La OAE fue inducida en ratas por inmunización con antígenos espermáticos y adyuvantes (grupo OAE). Las ratas del grupo control (CTRL) fueron inyectadas sólo con adyuvantes. El TNF-a (50ng/ml) in vitro, disminuyó la viabilidad celular (MTS, C:100.01±0.01, TNF-a:74.32±7.78 p<0.05; azul tripán, C:82.11±2.61, TNF-a:66.93 ±2.39 % p<0.01) e indujo apoptosis (ISEL) de las CG (C:11.82, TNF-a:44.39 % CG ISEL+ p<0.01). El contenido de TNF-a (ELISA) fue mayor en los medios condicionados (MC) provenientes de MT de ratas con OAE respecto de los MC de ratas CTRL (MCMT/CTRL:6.86±0.17, MCMT/OAE:13.95±1.25 pg/10(4)células p<0.01). A su vez, el MCMT/OAE redujo la viabilidad (MTS) de las CG aisladas de testículos de ratas con OAE (MCMT/CTRL:104.60±3.36, MCMT/OAE:87.80±4.49 p<0.01). El contenido del citocromo c (Western blot) aumentó en la fracción testicular citosólica (FC) y disminuyó en la mitocondrial (FM) de ratas con OAE respecto de las CTRL (FC: CTRL:160.03±15.38, OAE:527.52+61.67*;FM: CTRL:591.14±65.29, OAE:333.10±31.63* p<0.05). La actividad de la caspasa 9 (método colorimétrico) fue mayor en las CG de ratas con OAE respecto de las CTRL (CTRL:93.5±5.46, OAE:112.5±6.07 p<0.05). Los resultados sugieren que en la OAE los macrófagos del intersticio testicular estarían involucrados en la apoptosis de las CG y que el TNF-a sería uno de los mediadores de este proceso. Por otro lado, demostramos que la vía apoptótica mitocondrial interviene en la apoptosis de las CG en este modelo.