Disrupción Endocrina en Cichlasoma facetum por exposición subletal a Cipermetrina. II Reunión Binacional de Ecología. Mendoza, 31 Octubre- 5 Noviembre 2004.

ARGEMI, F., A. PORTA, & C. BONETTO.

Mendoza

Congreso; II Reunión Binacional de Ecología. Mendoza, 31 Octubre- 5 Noviembre 2004.; 2004

Asociación Argentina de Ecología

Ensayo de exposición. Los organismos utilizados en el presente estudio fueron criados en laboratorio, siendo su talla de 33,95 +/- 7 mm con una edad de 6 meses. El ensayo fue realizado en acuarios de 10 litros con agua declorinada. Se compararon tres tratamientos con 15 individuos cada uno. El primero correspondió a un tratamiento control, el segundo a  organismos inyectados con gonadotropina corionica humana (hCG) en una concentración de 100 UI en una sola dosis al comienzo del ensayo,  y el tercero a los organismos expuestos a cipermetrina, en una concentración de 5,6 ppb, asegurando de esta manera una exposición constante durante el periodo de 96 hs del ensayo.  Extracción de Esteroides Los organismos fueron retirados del ensayo y colocados directamente a -20 º C hasta su tratamiento. Fueron descamados y se les seccionaron las aletas y la cabeza, dado que a nivel cerebral se sintetizan esteroides con función local, asegurando de esta manera solo la extracción de los esteroides circulantes y gonadales. Se evaluaron dos solventes para su utilización en el método de extracción, diclorometano y metanol al 80 %, mediante ensayos de recuperación, para lo cual se inyectó intraperitoniamente con una concentración de 500 pg/ml. Las extracciones fueron realizadas, mediante el homogenato del tronco de los organismos, adicionándose 5ml del solvente. Luego se realizó un proceso de sonicación en baño de las muestras en intervalos de 1 min. por 1 min de frio repitiéndose el proceso 10 veces. Mediante centrifugación se obtuvo el sobre nadante, conservandose a -20ºC, el pellet fue resuspendido en 5 ml de solvente, realizando nuevamente el proceso de sonicación. Para la recolección de los esteroides, se secaron las muestras en baño de agua a 45ºC. Mediciones Hormonales Se utilizaron los métodos preconizados por (Solé et al 2003 , Goodberg et al. 1997) Los extractos secos de esteroides, fueron resuspendidos en buffer fosfato salino (PBS) a pH 7.4. Las mediciones de las concentraciones de T, se realizaron por radioinmunoensayo (RIA), mientras que las de E2 fueron realizadas por quimioluminicencia. Los valores observados fueron referidos a la masa (gr.) del tronco de los organismos analizados. Para el análisis de los datos se utilizó el software STATISTICA, realizando una ANOVA de una vía. Resultados Los protocolos de extracción realizados en base a los solventes utilizados, diclorometano y Metanol 80%, dieron como resultado una recuperación del 76 % para el primero y del 87 % para Metanol, del E2 inyectado intraperitonialmente, siendo el segundo solvente el utilizado en el presente trabajo. La concentración media hormonal de Testosterona (T) registrados en los organismos control fue 0.89 ng/gr, mientras que en los organismos inyectados con hCG fue de 2,4 veces mayor a los del control (2.14 ng/gr) y los organismos expuestos a cipemetrina redujeron su concentración en un 50 % (0.43 ng/gr), siendo estas diferencias estadísticamente significativas (Tuckey p < 0.05). No se registraron diferencias significativas para el Estradiol en los diversos tratamientos. Discusión Las concentraciones de Testosterona y 17-β Estradiol, varían en base al estado de desarrollo de los organismos y principalmente al sexo. La alta variabilidad en los datos observados, principalmente en las mediciones realizadas de 17-β Estradiol, puede deberse a la dificultad en el sexado de los organismos utilizados, dado que las especies del género Chichlasoma se diferencian sexualmente luego de 40-60 días posteriores a la eclosión), y carecen de dimorfismo sexual externo. Como posible solución se plantea el sexado post-ensayo, mediante la observación bajo lupa de las gónadas previo al proceso de extracción. El éxito reproductivo en peces, así como en el resto de los vertebrados, depende de la actividad integrada de los esteroides, hormonas y proteínas, del cerebro, hipófisis, hígado y gónadas (Gillesby & Zacharewski, 1998). Los niveles de esteroides sexuales circulantes representan una herramienta simple, altamente eficiente y sensible para evaluar los efectos subletales producidos por la exposición a compuestos disruptores endocrinos presentes en el ambiente (Goodberg et al., 1997,   Solé et al., 2003). El presente trabajo muestra que la exposición a concentraciones subletales de cipermetrina de la misma magnitud que las determinadas en arroyos que atraviesan parcelas cultivadas con soja en explotaciones comerciales  con el manejo convencional mas utilizado en nuestro medio (Jergentz et al., 2004) reduce los niveles de testosterona en juveniles de Chichlasoma facetum. La práctica agrícola convencional podría generar un impacto sobre la tasa reproductiva de Cf. La influencia de la disrupción observada en la actividad reproductiva en el ambiente se ignora y dependerá entre otros muchos condicionantes de la reversibilidad del efecto. Si el mismo se revierte con posterioridad a la exposición su efecto será probablemente reducido. Si por el contrario su efecto es permanente tendrá una enorme influencia en el potencial reproductivo de la especie, sugiriendo el interés de estudiar este tema con mayor detenimiento.  A su vez, resulta  difícil establecer a que nivel del eje hipotálamo-hipofisario-gonadal es producida la alteración, dado que solo se toma en cuenta el punto final del mencionado eje (concentración hormonal). Sería de suma importancia lograr establecer el sitio de acción, pero debido a la baja disponibilidad de estudios endocrinos reproductivos en peces y a la alta variabilidad de los sistemas endocrinos aún en especies estrechamente relacionadas, resulta dificil su determinación.