Empleo de líneas celulares epiteliales para el análisis de inmunomoduladores mucosales

SMALDINI P; FOSSATI CA; DOCENA GH

La falda, Córdoba, Argentina

Congreso; Congreso de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI). LVI Reunión científica anual.; 2008

Sociedad Argentina de Inmunologia

Empleo de líneas celulares epiteliales para el análisis de inmunomoduladores mucosalesSmaldini P, Fossati CA, Docena GHLISIN, Facultad de Ciencias Exactas UNLPLas células epiteliales de las distintas mucosas no sólo cumplen una función físico-química, sino que ejercen además un rol activador y modulador del sistema inmune de mucosas. El objetivo de este trabajo es utilizar distintas células epiteliales mucosales para el estudio de inmunomoduladores a emplear en el tratamiento de diferentes patologías.Se emplearon líneas epiteliales humanas de pulmón (A549), de intestino (Caco-2 y Caco-luciferasa), epiteliales murinas de intestino delgado (iCCL2) y cultivo primario de enterocitos de intestino delgado de ratón. Los estímulos empleados fueron: agonistas toll (Flagelina, Lipopolisacarido, Lipohexapéptido Pam3CSK4) (Flic, LPS y Lp) y citoquinas pro-inflamatorias (IL-1β, TNFa). Se evaluó la respuesta celular por citometría de flujo (TLR2) y PCR tiempo real (receptores tipo Toll-TLR2, TLR4, TLR5 y TLR9, quimokinas-MCP-1, IL-8 y CCL20 y citoquinas-IL-1 β, IL-6 y TNFa).Células intestinales humanas incubadas con distintos estímulos mostraron expresión de mRNA para CCL20 (Flic, IL-1β y TNFa), MCP-1 (Flic, LPS y TNFa) e IL-8 (Flic, LPS y TNF+Lp). Sólo hubo activación con Lp cuando las células fueron pre-estimuladas con Flic, IL-1β o TNFa. La cinética de activación de Caco-2 varió según el estímulo. Al analizar la expresión de mRNA para los diferentes TLR solo vimos una inducción estadísticamente significativa post-estimulación para TLR2, TLR5 y TLR9. La cinética de inducción de los distintos mRNA de TLR fue diferente.Para A549 e iCCL2 observamos inducción de mRNA CCL20 con Flic (FI: 3400± 600), LPS (FI:39±4.5), Lp (FI: 57±12), IL-1 β (FI:7820±3120) y TNFa (FI: 2094±440). Con respecto a iCCL2 los incrementos de mRNA CCL20 se observaron con: Flic (FI:477±269), LPS (FI:256 ±102), Lp (FI: 62±8.6). En estos casos se obtuvo una inducción en los mRNA para IL-1, IL-6 y TNFa. Se obtuvo el mayor incremento con LPS y Flic para TNFa (FI:57±21 con Flic y 558±210 con LPS).Estos resultados sugieren que Caco-2 expresa constitutivamente TLR-4 y 5, A549 e iCCL2, TLR-2, 4 y 5. Caco-2 solo expresa TLR-2 luego de ser activada.Por lo tanto, hemos caracterizado líneas epiteliales humanas y murinas, y sus formas de activación, las cuales serán utilizadas para la caracterización funcional de ligandos inmunomoduladores, a emplear por distintas vías mucosales.