INVESTIGADORES
SMALDINI Paola Lorena
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización in vivo e in vitro de alergenos de soja de reactividad cruzada con caseínas de leche de vaca
Autor/es:
DOCENA, GUILLERMO H; CANDREVA, ANGELA MARIA; CURCIARELLO, RENATA; SMALDINI, PAOLA ; GONZALEZ, VIRGINIA; PARISI, GUSTAVO; FOSSATI CA; PETRUCCELLI, SILVANA
Lugar:
Cuidad Autónoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXIII Congreso Anual de la Asociación Argentina de Alergia e Inmunología Clínica; 2010
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Alergia e Inmunología Clínica
Resumen:
La alergia a la leche de vaca constituye la
principal alergia alimentaria en numerosas regiones del mundo. Las
formulaciones a base de proteínas de soja empleadas como sustituto lácteo en
niños menores de 2 años de edad son frecuentemente no toleradas, aún sin haber
sido expuestos previamente a la soja. El objetivo de este trabajo fue identificar
y caracterizar alergenos de soja que presentan reactividad cruzada (RC) con
caseínas bovinas. Hemos identificado y clonado en E. coli a partir de una
biblioteca de cDNA de semillas inmaduras de soja 4 globulinas empleando
distintos vectores de expresión: A5A4B3, la subunidad α de la βconglicinina, p34 y p28. Mediante
el empleo de distintos métodos inmunoenzimáticos (ELISA indirecto y de
inhibición, EAST e inmunoblotting) confirmamos la RC en los 4 alergenos
recombinantes. La aplicación de herramientas de bioinformática nos permitió
seleccionar péptidos de 20 aminoácidos con potenciales epitopes de RC. Se
obtuvieron 3 péptidos en forma recombinante (epitopes conformacionales) y por
síntesis química (epitopes lineales) e identificamos secuencias conteniendo
epitopes IgG e IgE de RC. El estudio por scanning de alanina permitió
identificar ciertos aminoácidos críticos para la RC. La identificación de
epitopes B se realizó empleando antisueros específicos de proteínas de leche,
anticuerpos monoclonales anti-caseínas bovinas y sueros de individuos alérgicos
a leche de vaca sin historia previa de sensibilización a soja. Estas proteínas
de RC de soja fueron modeladas in silico y los epitopes seleccionados se
localizaron en la superficie de las mismas, por lo cual son accesibles a los
anticuerpos presentes en el medio. Finalmente se empleó un modelo murino de
alergia a leche de vaca, por sensibilización intragástrica empleando toxina
colérica y proteínas de leche, y se analizó la aparición de signos clínicos compatibles
con una reacción de hipersensibilidad posterior al desafio oral con leche o
soja. Se indujeron anticuerpos IgE e IgG1 específicos de leche bovina que
reconocieron los distintos componentes de soja, se demostró la presencia de
esplenocitos específicos de leche bovina que fueron estimulados in vitro con
proteínas de soja, se indujo la secreción de IL-5 post-estímulo con soja o
leche, y finalmente se obtuvieron pruebas cutáneas positivas por inoculación
subcutánea de proteínas de leche o de soja. En conclusión, logramos expresar
proteínas de soja en E. coli, estas proteínas fueron reconocidas por distintos
anticuerpos específicos anti-proteínas de leche, lo cual demuestra que la RC se
debe a la presencia de epitopes conservados y no de hidratos de carbono.
Mapeamos epitopes IgG e IgE, detectamos posiciones aminoacídicas críticas para
la RC y demostramos in vivo la alergenicidad cruzada de las mismas con
proteínas de leche de vaca. Estos resultados podrían explicar la intolerancia
clínica observada en pacientes alérgicos a la leche de vaca que son tratados
con formulaciones a base de proteínas de soja.