El dominio carboxilo terminal de la RNA polimerasa II como pieza fundamental del acoplamiento transcripción-splicing alternativo

DE LA MATA, MANUEL; CRAMER, PAULA; KORNBLIHTT, ALBERTO R.

Carlos Paz, Córdoba, Argentina

Congreso; XXXVII Reunión Anual de la SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACION BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR (SAIB); 2001

SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACION BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR (SAIB)

Desde las primeras descripciones del acoplamiento entre la transcripción y el procesamiento del mRNA, la RNA polimerasa II (RNAPII) y más específicamente su dominio carboxilo terminal (CTD) han sido considerados piezas fundamentales de esta coordinación. Se sabe que el CTD es capaz de unirse a diversos factores de capping, splicing y poliadenilación, pero los mecanismos que regulan el acoplamiento transcripción-splicing son poco comprendidos. En este trabajo estudiamos el papel de la RNA pol II en esta regulación, mediante una estrategia que nos permite expresar distintos mutantes de RNAPII en células cuya RNAPII endógena es inhibida por a-amanitina. Las variantes de RNAPII expresadas son resistentes a a-amanitina y presentan diversas deleciones en su CTD o una mutación puntual que le confiere una reducida capacidad elongadora de la transcripción. Las diferentes mutantes son capaces de modificar el patrón de splicing alternativo de un minigén de fibronectina cuando son co-transfectadas con el mismo a líneas celulares, a la vez que afectan la elongación por parte de la RNAPII. Nuestros resultados apoyan un modelo cinético en el cual el acoplamiento transcripción-splicing es regulado por la capacidad  elongadora  de la RNAPII, siendo el CTD el blanco de esta regulación. Esta hipótesis complementa el modelo que establece que la unión diferencial de factores de splicing al CTD determina el patrón final de splicing alternativo.