Cocirculación de cuasiespecies del genotipo F del HBV del tipo salvaje junto a una mutante de escape a anticuerpos anti HBs

MATHET V; FELD M; VERDUN R; QUARLERI JF; FENILI C; MANDÓ O; CARBALLAL G; SANCHEZ DO; OUBIÑA JR

Buenos Aires, Argentina

Congreso; X Congreso Argentino de Hepatología; 1999

Objetivo: Investigar factores genómicos del HBV asociados al curso evolutivo severo de un paciente con hepatitis crónica y cirrosis con HBs Ag y fluctuante coexistencia de anticuerpos anti HBs en suero. Paciente, Materiales y Métodos: Paciente adulto con hepatitis crónica activa severa y cirrosis documentadas en 1995. Se determinaron seriadamente los marcadores virales para HBV, HAV y HCV. Se investigó el ADN viral sérico por PCR. Una vez detectado el gen S, se estudió el genotipo mediante RFLP y se investigaron sus cuasiespecies mediante SSCP. Se clonó el fragmento amplificado del gen S en E. coli y se secuenció el ADN. Las secuencias obtenidas a partir de los 5 clones fueron alineadas con la de los genotipos A - F (provenientes del GenBank). Se construyó un árbol filogenético. Se estudió mediante análisis computacional la región peptídica correspondiente al determinante mayor a (responsable de la unión a anticuerpos neutralizantes anti HBs) y sus regiones flanqueantes, determinándose la antigenicidad para cada clon. Resultados: Los marcadores virológicos fueron positivos sólo para HBV. El HBs Ag persistió (+) desde 1995 a la fecha. Se observó seroconversión HBe Ag hacia anti HBe en 1995, tornándose éste no detectable en 1996, y reapareciendo desde 1997. Una muestra de 1998 con ADN de HBV (PCR [+] para el gen S) fue tipificada por RFLP como genotipo F. El análisis por SSCP reveló la cocirculación de múltiples cuasiespecies. El alineamiento de las secuencias obtenidas a partir de 5 clones y el árbol filogenético confirmaron la genotipificación. El determinante mayor a del HBs Ag exhibió los aminoácidos habituales del genotipo F en 4 de los 5 clones. En el clon restante, se documentó la sustitución Cys por Arg en posición 124, debido a la transición T -> C en la posición nucleotídica 370. Externamente al determinante a, 3 clones exhibieron sustituciones aminoacídicas en las posiciones 76 (Cys por Arg), 110 (Leu por Ile), 113 (Ser por Pro) y 158 (Leu por Phe), respectivamente. Conclusiones: Se describe la cocirculación de cuasiespecies correspondientes al virus salvaje HBV genotipo F, así como de mutantes del gen S. Una de las mutaciones ocurrió en un sitio crítico codificante del determinante mayor a, lo que constituye una ventaja selectiva del HBV para evadir la respuesta inmune humoral del huésped. De producirse la transmisión de dicha población viral a otros pacientes, la infección de éstos podría ser posible a pesar de una inmunización previa eficaz con las vacunas actualmente disponibles, debido a una afinidad disminuida entre los epítopes virales de la variante de escape y los anticuerpos producidos.