SEÑALES INVOLUCRADAS EN LA PROLIFERACIÓN CELULAR AUMENTAN LOS NIVELES DE EXPRESIÓN DE RAC3 POR ACCIÓN DIRECTA A NIVEL DE SU PROMOTOR

C. ALVARADO; S. MICENMACHER; P. N. FERNÁNDEZ LARROSA; M.F. RUBIO; M. RUIZ GRECCO; M. COSTAS

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

SAIC

Demostramos que el coactivador de receptores nucleares RAC3,  es también coactivador de NF-kB y que tiene actividad protectora de la apoptosis y   participa en la regulación de proteínas clave del ciclo celular. Aunque sus niveles son limitantes en células normales, su sobre-expresión se asocia al desarrollo de tumores tanto hormono-dependientes como independientes. Demostramos previamente que la citoquina TNF-a y el factor de transcripción NF-kB modulaban positivamente la expresión proteica de RAC3 en células no tumorales HEK293 (con bajos niveles del mismo). Con el objetivo de analizar si esta vía u otras señales desreguladas en tumorigenesis como el supresor tumoral P53 o condiciones de hipoxia previas a  la angiogénesis podrían actuar en etiquetas blanco del promotor del gen de RAC3 y su efecto modulador sobre el mismo, se amplificó mediante PCR con primers específicos sobre ADN genómico la región de 967pb contiendo el primer exon del gen y fue clonada en el plásmido pGL3-basic río arriba del gen de luciferasa. La construcción fue transfectada en células HEK293, sola o simultáneamente con vector de expresión de los distintos factores: NF-kB, Ikb-ss y P53. Se observó un aumento de actividad luciferasa de un 300 +/-20% en contransfección con la subunidad RelA de NF-kB respecto de condiciones basales, que disminuyó un 200 +/-20% en presencia de Ikb-ss super-represor que impide la activación de NF-kB y un aumento de 50 +/-5%  al ser estimuladas con TNF-a por 24hs. Por cotransfección con P53 se vió un aumento del 450+/-30%  mientras que al ser llevadas a condiciones de anaerobiosis 1%O2 por 3h se apreció una disminución de la actividad de 10+/-2%. Resultados similares se observaron a nivel proteico mediante western blot.  De acuerdo con estos resultados, se puede concluir que las señales habitualmente involucradas en la proliferación celular y el desarrollo tumoral pueden ser responsables directas del aumento en los niveles de expresión de RAC3.