SOBREINFECCIÓN IN VITRO CON DOS CEPAS DE HIV-1 CON REACTIVACIÓN DE LA PRODUCCIÓN VIRAL

P. N. FERNÁNDEZ LARROSA; A. CEBALLOS; R.D. RABINOVICH; S. MARQUINA; L. A. MARTÍNEZ PERALTA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; Congreso Nacional de Microbiología; 2001

AAM

La infección por HIV-1 se caracteriza in vivo por una alta producción de virus al igual que la acumulación de distintas variantes, lo que podría permitir la sobreinfección celular. Además, la alta frecuencia de recombinantes circulantes es una de las consecuencias de la sobreinfección con distintas cepas de HIV-1. Sin embargo, no se han descripto suficientes trabajos sobre la producción viral en células sobreinfectadas. Para estudiar si debido a la sobreinfección con una cepa viral diferente se produce reactivación en la producción viral, células de la línea H9-HTLVIIIB persistentemente infectadas con la cepa HXB2 fueron sobreinfectadas con la cepa MN (m.o.i.=1) por un método previamente desarrollado en nuestro laboratorio. En las células sobreinfectadas, se separó la fracción cromosómica y extracromosómica por la técnica de Hirt y se caracterizó el ADN viral en ambas fracciones a los días 1 al 15 post-sobreinfección (ps) . Se tituló la producción viral de los días 1 al 6 ps, utilizando como sistema revelador células MT2 para detectar la producción de sincicios.  La producción de antígeno p24 fue cuantificada a los días 1 al 4 ps mediante un equipo de ELISA comercial. El virus amplificado por las MT2 fue caracterizado por neutralización con una anticuerpo monoclonal antiHXB2 y por amplificación de la región C2V3 del gen env en una nested-PCR seguida de digestión con BsmA I..En las células sobreinfectadas se  encontró genoma de ambas cepas hasta el día 8, pero la proporción del genoma de la cepa sobreinfectante decrece rápidamente después del día 4. El virus producido al día 1 ps no fue totalmente neutralizado tanto por un anticuerpo monoclonal contra HXB2 o un anticuerpo policlonal contra MN. Cuando se cuantificó la producción de antígeno p24 del día 1, se observó un incremento de 30 veces y se produjo un aumento de 2 log en la producción de virus infeccioso. Los títulos en los días posteriores no difieren significativamente de los cultivos no sobreinfectados. La caracterización del virus producido mostró que en el día 1 ps se producen ambas cepas virales en cantidades similares, en tanto que a partir del día 2 se detecta sólo la cepa primoinfectante.La sobreinfección de la línea celular H9-HTLVIIIB con la cepa MN produjo un aumento transitorio de la producción viral total, que incluye una reactivación de la cepa primoinfectante. Es probable que este mecanismo juegue un papel importante en la fisiopatogenia de la infección por HIV-1 in vivo.