Interacción entre el receptor de glucocorticoide (GR) y el de progestágenos (PR) en células vivas mediante análisis de correlación cruzada de fluorescencia

MARINI, MS; OGARA, MF; STORTZ, M; LEVI, V; PECCI, A

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

El receptor de glucocorticoide (GR) y de progestágenos (PR) son miembros de la familia de receptores esteroideos. Poseen características estructurales y funcionalessimilares y reconocen las mismas secuencias en el ADN. La activación del PR está asociadaa la proliferación celular y la progresión de tumores mamarios, mientras que la activación del GR favorece la diferenciación celular. Así, la abundancia relativa de ambos receptores podría modular la respuesta proliferativa del epitelio mamario. En vista a estos antecedentes, el objetivo del trabajo fue analizar la capacidad de ambos receptores de formar parte de un mismo complejo. Se realizaron ensayos de co-inmunoprecipitación de proteínas a partir de extractos celulares de la línea celular T47D/A1-2 (que coexpresa GR y PR) tratados con la nucleasa benzonasa. Se observó que ambos receptores co-precipitan independientemente de la integridad del ADN. A fin de evaluar si PR y GR tienen la potencialidad de formar complejos in vivo se transfectaron células T47D con vectores de expresión que codifican para ambos receptores fusionados a proteínas fluorescentes (mCherry-GR y GFP-PR) y se realizaron determinaciones de correlación cruzada de fluorescencia. En particular, utilizamos la técnica de N&B de dos colores en la cual se determinó el parámetro de correlación cruzada de Brillo (Bcc), el cual se relaciona con el grado de interacción entre dos moléculas fluorescentes. A partir de este análisis se observó que en las células tratadas conjuntamente con el progestágeno R5020 y el glucocorticoide Dexametasona, el Bcc fue mayor (Bcc=0,042±0,004) comparado con el obtenido en células tratadas con cada hormona por separado (Bcc=0,008±0,004). Mutaciones en los dominios de dimerización del GR afectaron la capacidad de formar complejos con PR, sugiriendo la existencia de heterodímeros PR-GR.