Mecanismos endocitóticos y su relación con el ciclado vesicular en células cromafines de ratón

ANDRÉS PÉREZ BAY; LORENA I. IBAÑEZ; OSVALDO D. UCHITEL; FERNANDO D. MARENGO

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedades Biomédicas (SAIC, SAIB, SAN, SAB)

Mecanismos Endocitóticos y su Relación con el Ciclado Vesicular en Células Cromafines de Ratón. Andrés Pérez Bay, Lorena  Ibáñez, Osvaldo Uchitel, Fernando Marengo. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular IFIBYNE - Fac Ciencias Exactas y Nat.  - UBA   Los mecanismos endocíticos que recuperan la membrana y las vesículas liberables luego de una exocitosis masiva no están bien definidos en células cromafines. En este trabajo, por medio del uso del fluoróforo FM 1-43 se determinó que la célula cromafín es capaz de recuperar totalmente su membrana plasmática luego de una exocitosis masiva (> 70% de la membrana plasmática) provocada por una despolarización por 3´ con K+ 50 mM (Ca++ 2mM). Una segunda despolarización bajo las mismas condiciones de K+ y Ca++, solamente exocita el 32"7% del fluoróforo internalizado, reteniéndose el resto en grandes corpúsculos localizados y  delimitados. La baja liberación de fluoróforo previamente internalizado no se debió a una exocitosis basal entre ambas estimulaciones, ya que la ausencia de Ca++ en ese período no aumentó esa fracción. Para reducir la cantidad de membrana reciclada, se bajó la concentración de Ca++ durante el estímulo a 0,5 mM. En estas condiciones las células fueron capaces de reciclar la totalidad de la membrana exocitada en nuevas vesículas liberables (24"4 vs 21"3%, n=14), lo que se acompañó de una marcada disminución de corpúsculos fluorescentes al final del experimento. Experimentos en los que se reemplazó Ca++ por Ba++ confirman estos resultados. En resultados preliminares se observó que la estimulación en presencia de dextranos fluorescentes (40000 KD) permite marcar (con baja eficiencia) corpúsculos celulares. Estos resultados sugieren la existencia en células cromafines de un proceso endocítico que se activaría en condiciones de alta exigencia a fin de mantener la homeostasis de la membrana plasmática, pero a la vez incapaz de recuperar el “pool” liberable de vesículas en el marco temporal de nuestros experimentos. Un proceso de “bulk” endocitosis, con la consecuente formación de vacuolas y/o cisternas sería un mecanismo posible.