Prevalencia de genes de virulencia de cepas de stapyhlococcus aureus de origen bovino aisladas de Santa Fe y Córdoba

MOLINA M

Santa Fe

Encuentro; XXII Encuentro de Jóvenes Investigadores; 2018

Universidad Nacional del Litoral

La mastitis bovina es una de las enfermedades infecciosas más prevalentes del ganado vacuno que genera grandes pérdidas económicas a los productores y la industria láctea mundial (Hogeveen y col., 2011). Si bien la mastitis es causada por numerosos agentes etiológicos, Staphylococcus aureus es el patógeno más frecuentemente aislado de casos de mastitis, tanto en Argentina (Calvinho y Tirante, 2005),como en otros países de gran desarrollo lechero (Reyher y col., 2011). Aunque S. aureus puede causar mastitis aguda y clínica con alteración macroscópica de la leche, la forma más frecuente de presentación es la subclínica con tendencia a la cronicidad, sin alteración macroscópica de la leche, pero con recuentos elevados de células somáticas y persistencia de las bacterias en la glándula mamaria (GM) (Bardiau y col., 2014). En la última década numerosos genes de virulencia de S. aureus (spa IgG-binding,spa X-región, nuc, clfA, clfB, coa, hla, hlb, fnbA, fnbB, cap, agrI, agrII, agrIII, icaA, icaD, icaC,bap) han sido descriptos en aislamientos provenientes de mastitis bovina (Bardiau y col.,2014). Además, ciertos genes pueden estar asociados con determinantes de resistencia(mecA, blaZ) e hipervirulencia (Haveri y col., 2007). Por otra parte, se ha demostrado que S.aureus posee diferentes habilidades para colonizar el tejido y diseminarse dentro de la GM y que estas diferencias son debidas a la expresión de los Factores de virulencia (Klein y col.,2012), los cuales influyen en la difusión en el rodeo.Estudios epidemiológicos moleculares sobre aislamientos de S. aureus bovinos han demostrado que un gran número de tipos están implicados en la etiología de la mastitis en todo el mundo y que ciertos tipos parecen predominar dentro de regiones geográficas(Lundberg y col., 2014). Se colectaron 86 cepas de S. aureus desde el año 2006 a 2016 de origen bovino con IIM subclínicas de diferentes tambos ubicados en la provincia de Santa Fe. Específicamente en las ciudades de Esperanza y Rafaela y de tambos de laprovincia de Córdoba, ubicados en las ciudades de Río Cuarto, Río Segundo y General SanMartín. Se procedió a extraer y purificar ADN genómico de todos los aislamientos de S. aureus siguiendo la metodología descripta por Kumar y col. (2008). Posteriormente se realizó PCR convencional utilizando oligonucleótidos para amplificar los siguientes genes relacionados con adherencia e internalización: clfA, clfB, fnbA, fnbB, fib y genes que intervienen en la formación de biofilms: icaA, icaD, icaC y el gen bap. Se utilizó la metodología empleada previamente en el laboratorio (Pereyra y col., 2016). Se determinó la prevalencia de los diferentes grupos agr (gen accesorio regulador): Los grupos agr fueron determinados mediante PCR multiplex utilizando primers para los cuatro grupos agr (I, II, III y IV) siguiendo la metodología previamente descripta por Gilot y col. (2002). Además se evaluó la prevalencia de la región variable X y región de unión a IgG de spa. Los resultados de prevalencia que se obtuvieron de los genes que codifican para la expresión de proteínas de adherencia e internalización: clfA, clfB, fnbA, fnbB, fib, fueron elevadas en todas las regiones evaluadas, entre un 90% y 100%. En general en nuestros ensayos, el locus ica mostró prevalencia elevada y uniforme;observándose para icaADC 100%, mientras el 100% resultó bap negativa, coincidiendo con la bibliografía encontrada.Lo que se pudo observar hasta el momento, que la mayoría de las cepas de origen subclínica presentan el gen agrI, encontrándose solo en tres cepas agrII positivos y no sedetectaron cepas agrIII o agrIV en todos los aislados.Con respecto a la prevalencia de los genes que codifican para la región variable X y región de unión a IgG de spa fueron elevados los porcentajes de prevalencia evaluados. A partir de los resultados obtenidos se demostró que en todas las cepas estudiadas,independientemente del área geográfica, presentaron una alta prevalencia de los factores devirulencia más relevantes.