Evaluación de linfocitos Tγδ durante el posparto en vacas lecheras

CAINELLI, SOFIA; PERALTA, BELÉN M ; STASSI, ANTONELA F; ENGLER, CAROLINA; ANGELI, EMMANUEL; ORTEGA, HUGO H; VELÁZQUEZ, MELISA L

Esperanza - Santa Fe

Jornada; JORNADA DE DIFUSIÓN DE LA INVESTIGACIÓN Y EXTENSIÓN; 2022

Facultad de Ciencias Veterinarias - UNL

Las vacas lecheras de alta producción sufren marcadas variaciones en las concentraciones plasmáticas de metabolitos y hormonas durante el período posparto temprano. Estas variaciones pueden afectar la funcionalidad del sistema inmune así como también la ciclicidad ovárica y la función uterina, generando subfertilidad e infertilidad. La consecuente reducción en la eficiencia reproductiva y la disminución de la producción lechera perjudican económicamente la industria láctea, así como el bienestar animal 2. La depleción del sistema inmune y la mayor incidencia de enfermedades infecciosas en vacas lecheras durante el posparto podrían estar relacionadas con cambios en la proporción y biodistribución de las diferentes poblaciones de linfocitos T (LT). En bovinos, las poblaciones de LT más estudiadas son los LT colaboradores, LT citotóxicos y los LTγδ. Los LT colaboradores participan mediando el desarrollo de la respuesta inmune humoral así como también en la inmunidad mediada por células, produciendo diferentes citoquinas que promueven principalmente los mecanismos efectores de macrófagos y linfocitos. Los LT citotóxicos reconocen y eliminan células infectadas con parásitos y bacterias y células tumorales 4. Por su parte los LTγδ en bovinos merecen especial atención ya que su número en sangre periférica es preponderante en comparación a lo observado en circulación para especies no rumiantes. Si bien los LTγδ producen citoquinas propias de los LT colaboradores (IFNγ, IL-17, IL-4 e IL-10) y pueden tener actividad citotóxica como los LT citotóxicos, estudios previos han observado que participan también en la regulación de la respuesta inmune produciendo IL-10 y TGF-β, siendo la principal población LT reguladores en bovinos. Sin embargo, aún no se conoce con claridad la función específica de estas células durante el periodo posparto y la lactancia en torno a la implantación. Existen dos subpoblaciones de LTγδ, WC1+ y WC1-, de acuerdo al sitio en donde residen o al cual migran, siendo las LTγδ WC1+ las más abundantes en sangre periférica 1. El objetivo de este trabajo fue evaluar la proporción de LTγδ en sangre periférica en bovinos, durante el posparto y a lo largo de la lactancia, teniendo en cuenta su potencial efecto sobre la receptividad endometrial pospartal.Para el estudio se seleccionaron vacas Holando Argentino (n=20), de entre 2 y 4 lactancias, provenientes de un tambo comercial con parición estacionada. Se realizó una evaluación clínica a las vacas seleccionadas, de manera tal de incluir en el estudio sólo animales sanos, y excluir aquellos que presentaban enfermedades o complicaciones pospartales como retención de placenta, distocia, pérdida fetal, metritis, entre otras. Previo al inicio del muestreo, se sincronizaron los ciclos estrales por aplicación de dos dosis de prostaglandina F2α separadas por 11 días, corroborando posteriormente la ovulación y la formación del cuerpo lúteo mediante ecografía. Luego de los 60 días posparto (DPP) los animales fueron re-sincronizados por aplicación de una nueva dosis de prostaglandina F2α, 11 días posteriores a la última administración. A los 70 DPP los animales fueron liberados a servicio y se realizó el diagnóstico de preñez mediante tacto y ultrasonografía. Aquellos animales que no se preñaron, fueron nuevamente re-sincronizados e inseminados sucesivamente hasta lograr la preñez. Los animales fueron agrupados teniendo en cuenta su intervalo parto-concepción (IPC): IPC menor o igual a 90 DPP (IPC≤90, 83 ± 6, n=8), IPC entre 90 y 120 DPP (IPC90-120, 97 ± 6, n=4) e IPC mayor a 170 DPP (IPC≥170, 208 ± 38, n=8). A los 45, 60, 90, 120, 150 y 180 DPP, se tomaron muestras de sangre periférica en tubos con anticoagulante (EDTA) por punción de vena yugular. Por medio de la lisis de glóbulos rojos se obtuvo la población de leucocitos totales. Dichos leucocitos fueron marcados con anticuerpos específicos para LTγδ (anticuerpo anti-bovine WC1 conjugado a FITC, monoclonal, Biorad), adquiridos por citometría de flujo y los datos obtenidos fueron evaluados con el software Flow Jo. Para el análisis estadístico se utilizó el software SPSS, y se empleó un modelo lineal generalizado, considerando la población de LTγδ como variable respuesta y los DPP como factor fijo.Los porcentajes circulantes de LTγδ en el grupo IPC90-120 mostró diferencias significativas a lo largo del tiempo (Figura 1B; P = 0,049). Específicamente, en el grupo IPC90-120, los porcentajes de LTγδ a los 90 DPP fueron significativamente menores que a los 120 y 150 DPP. Sin embargo los porcentajes circulantes de LTγδ en los grupos IPC≤90 e IPC≥170 no mostraron diferencias significativas a lo largo del tiempo (Figura 1A y 1C respectivamente; P > 0,05).Los porcentajes de LTγδ en sangre periférica hallados concuerdan con reportes previos en los cuales en bovinos adultos representan entre 2 y 15% 1. En relación con el número de LTγδ durante el posparto en vacas lecheras, reportes previos han permitido demostrar que los LTγδ WC1+ disminuyen en sangre durante los primeros 4 meses luego del parto 1. Por el contrario, a partir de nuestros resultados pudimos observar que el porcentaje de células LTγδ WC1+ en el posparto no siguen el mismo patrón de distribución en todos los grupos estudiados, mostrando en el grupo IPC90-120 una depleción significativa a los 90 DPP de las mismas en circulación. Esto podría estar relacionado con una migración de dicha población celular hacia el útero para participar probablemente en la generación de un microambiente tolerogénico que permita la implantación y crecimiento del embrión en los estadios tempranos del desarrollo 3, favoreciendo así en los animales un IPC favorable en los rodeos. Sin embargo son necesarios estudios adicionales para confirmar dicha hipótesis, evaluando la presencia de LTγδ en endometrio.