Estudio del crecimiento de la envoltura de Thermus thermophilus HB8

FEDERICO ACOSTA; FELIPE CAVA; MIGUEL ANGEL DE PEDRO; JOSE BERENGUER

Sevilla

Congreso; XXI Congreso Nacional de Microbiología; 2007

Sociedad Española de Microbiología

Estudio del crecimiento de la envoltura de Thermus thermophilus HB8 Acosta, F*. , Cava, F. , de Pedro, M.A. y Berenguer, J. Centro de Biología Molecular Severo Ochoa. Universidad Autónoma de Madrid-CSIC, Madrid. facosta @cbm.uam.es Thermus thermophilus posee una envoltura compleja, que incluye una membrana citoplasmática limitada por una fina capa de peptidoglicano de composición similar a los Gram positivos, a la que se une covalentemente una capa de polisacáridos, llamada SCWP (Secondary Cell Wall Polymer). Más externamente se encuentra una capa S (disposiciones cristalinas bidimensionales de subunidades proteicas) que a su vez parece constituir una especie de andamiaje sobre el que se embeben los componentes de una membrana externa primitiva. Los mecanismos de unión de las capas S a las estructuras subyacentes son muy variadas. En muchas proteínas S de bacterias Gram positivas se han identificado secuencias conservadas, denominadas SLH (S-layer Homology). Los organismos que poseen estos dominios también poseen homólogos de CsaB, una proteína implicada en la piruvilación de los SCWP descrita en Bacillus anthracis. Como parte de este trabajo se analiza el aumento de la piruvilación de la SCWP, mediante la expresión controlada de CsaB en mutantes csaB, utilizando microscopía electrónica. Por otro lado, se estudia la incorporación de subunidades proteicas a la capa S preexistente en la bacteria. Debido a su rigidez, es poco probable que exista un mecanismo de incorporación y posterior difusión horizontal sino que lo más factible es que la incorporación de subunidades ocurra sobre las posiciones definitivas de éstas en la envoltura. En un trabajo anterior de nuestro laboratorio se determinó, mediante marcaje covalente de las subunidades de SlpA con agentes fluorescentes y posterior seguimiento del crecimiento (las zonas nuevas quedan sin marca fluorescente), que se produce incorporación de subunidades proteicas nuevas en áreas concretas de crecimiento de la célula, con la conservación completa de las subunidades de los polos celulares. En esta comunicación se intenta confirmar los resultados obtenidos, mediante la inserción de pequeñas etiquetas aminoacídicas ( 8-15 aa ) dentro de sitios poco conservados de la secuencia aminoacídica de SlpA , para el posterior localizaciónde las subunidades recién incorporadas mediante inmunomicroscopía confocal.