Evaluación de los antígenos recombinantes Tc3 y Tc6 de Trypanosoma cruzi en el diagnóstico de Chagas

BELLUZO B; MARCIPAR I; RACCA AL

Mar del Plata (Bs As)

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

El diagnóstico serológico de la infección por Trypanosoma cruzi hace uso de distintas herramientas según se busque realizar confirmación de la infección, infección neonatal, monitoreo de tratamiento, marcadores de daño cardíaco o tamizaje de infección en poblaciones. En este último caso, el uso de un grupo limitado de antígenos, producidos mediante tecnología de ADN recombinante, ha mostrado una detección con alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, en muchos estudios en los que se evalúan reactivos preparados con dichas moléculas, existen aun discrepancias con los resultados obtenidos mediante ensayos de referencia. Por eso, la incorporación de nuevos antígenos que mejoren la sensibilidad de los kits diagnósticos es necesaria. En el presente trabajo se evaluaron las proteínas, Tc3 y Tc6, con el fin de ser utilizadas en la determinación de la infección por T. cruzi mediante un ensayo ELISA. Si bien dichas proteínas fueron descriptas mediante análisis genómico del parásito (Goto y colaboradores, 2008)*, sus funciones y características biológicas no han sido aun estudiadas. Inicialmente, se obtuvieron mediante clonado los segmentos carboxilo terminal de ambas proteínas repetitivas, las cuales se sobre-expresaron en forma soluble en el sistema de expresión pET32a/BL21DE3 (Novagen), lográndose obtener 40 mg y 16 mg/L de cultivo, de Tc3 y Tc6, respectivamente y una pureza mayor al 95%. Posteriormente, se evaluaron ambas proteínas frente a un panel de sueros de pacientes infectados con T. cruzi (n= 65) y de individuos sanos (n=91), provenientes de la misma región endémica, determinados mediante ELISA y hemoaglutinación indirecta (Wiener Lab, Argentina). Los ensayos de ELISA se desarrollaron según el protocolo estándar de nuestro laboratorio, realizando las determinaciones por duplicado. Los resultados obtenidos mostraron una sensibilidad del 75,4% y una especificidad del 100% para Tc3. En el caso de Tc6 la sensibilidad fue del 33,4% y la especificidad del 86,8%. La evaluación del comportamiento de estas moléculas permite ampliar los datos publicada originalmente en 2008*. Los resultados nos indican un gran potencial de Tc3 para complementar mezclas antigénicas en futuros ensayos de ELISA con fines diagnósticos.