Expresión de TNF-alfa en la glándula mamaria de vaca infectadas Saphylococcus aureus tratadas con un inmunomodulador

DALLARD B,; RUFINO V,; HEFFEL S,; BARAVALLE C,; CALVINHO LF

Esperanza, Santa Fe.

Congreso; V Reunión Argentina de Patología Veterinaria; 2006

Asociación Argentina de Patología Veterinaria

La inmunidad innata representa la primera línea activa de defensa en la respuesta del hospedador a la infección por S. aureus y otros patógenos y con frecuencia se caracteriza como un estado proinflamatorio. Citoquinas como IL-1alfa, IL-8 y TNF-alfa (tumor necrosis factor) contribuyen al establecimiento de la inflamación por alteración de la permeabilidad vascular, promoviendo el reclutamiento de neutrófilos hacia el sitio de infección y la inducción de la síntesis hepática de proteínas de fase aguda que facilitan la activación del complemento y detección del los componentes de la pared bacteriana por parte del el hospedador. Durante la mastitis, cambios en la expresión de IL-1alfa,  IL-8 y TNF-alfa han sido bien caracterizados. La fuente de estas citoquinas proviene principalmente de células residentes dentro de la glándula mamaria, incluyendo células epiteliales y macrófagos. S. aureus es un patógeno mayor  de la ubre y produce serios problemas de pérdidas económicas para la industria lechera. Las infecciones intramamarias (IIM) por esta bacteria tienden a hacerse crónicas y a menudo resisten las terapias antibióticas.  La infección persistente con S. aureus  se ha asociado con un deterioro de la respuesta inmune, mediado por factores tanto de origen bacteriano como del  hospedador. Tradicionalmente, el control de las IIM durante el período de vaca seca se realiza con antibióticos de acción prolongada. Las limitantes de esta práctica determinan la necesidad de explorar potenciales medidas de control que impliquen la manipulación del sistema inmune de la glándula mamaria bovina. Los modificadores de la respuesta biológica (MRB) o compuestos inmunomoduladores se han utilizado individualmente para potenciar regímenes de terapia antibiótica o de inmunización específica (vacunas), y pueden convertirse en una alternativa eficaz a los métodos tradicionales de control de las enfermedades. EL objetivo del presente trabajo fue evaluar por inmunohistoquímica la expresión de TNF-alfa en glándula mamaria de vacas con ubres infectadas crónicamente con S. aureus tratadas con un MRB después del secado. Se utilizaron vacas Holstein no preñadas al final de la lactancia. Después del último ordeño se administró MRB y placebo en cuartos infectados con S. aureus (n=7). Por otra parte, se utilizaron cuartos libres de infección sin ningún tipo de tratamiento (n=7). El estado de infección de los cuartos fue determinado seis meses antes de la iniciación del experimento y confirmado 20 días antes de la inoculación a través de cultivos bacteriológicos de muestras de secreción mamaria. La obtención de las muestras de tejido se realizó en matadero a los 14 días del secado. El inmunomodulador utilizado contiene 0.35 moles de lipopolisacárido de una cepa no patógena de Escherichia coli, 45 mg/100 ml de fracciones membranosas y ribosomales de la misma cepa, liposomas y gentes de formulación. La expresión de TNF-alfa se evaluó por IHQ (método streptavidina-peroxidasa) y se cuantificó mediante análisis de imágenes con el programa Image Pro-Plus 3.0.1® (Media Cybernetics, Silver Spring, MA, USA). Los resultados se expresaron como porcentaje de área inmunomarcada. El análisis estadístico se realizó por ANOVA y test de Duncan utilizando el software SPSS (versión 11.0 para Windows, SPSS Inc.©). En tejido mamario infectado y no infectado, la expresión de TNF-alfa   se asoció a estructuras del parénquima y estroma de la glándula mamaria. Se observó marcación intensa del citoplasma de las células epiteliales alveolares y de conductos excretores. El citoplasma de macrófagos, neutrófilos, eosinófilos y linfocitos intraepiteliales reaccionó intensamente a la inmunomarcación al igual que los endotelios y fibras musculares lisas de los vasos sanguíneos. Los mayores porcentajes de expresión de TNF-alfa  se observaron en cuartos crónicamente infectados con S. aureus, mientras que en cuartos no infectados la marcación fue significativamente menor (p<0.05). No se registraron diferencias en la expresión de TNF-alfa entre los tratados con MRB y placebo, lo que podría sugerir que el producto administrado al momento del secado no altera la distribución ni expresión de este factor de crecimiento en vacas con mastitis crónica por S. aureus.