Evaluación del efecto inmunoprotector de panax ginseng en glándula mamaria murina infectada con Staphylococcus aureus

SILVESTRINI P.; BECCARIA C.; RENNA M.S.; PEREYRA E.A.L.; ORTEGA H.H.; CALVINHO L.F.; DALLARD B.E.; BARAVALLE C.

Mar del Plata

Congreso; X Reunión Argentina de Patología Veterinaria; 2016

Sociedad de Medicina Veterinaria(SOMEVE)

El uso de compuestos modificadores de las respuestas inmunes frente a infecciones intramamarias (IIM) en bovinos, constituye una alternativa a los tratamientos tradicionales con antibióticos. El ginseng es la raíz del Panax ginseng (PG) C.A. Meyer (Araliaceae), y ha sido ampliamente utilizado para el tratamiento y prevención de numerosas enfermedades en animales y humanos. Si bien estudios previos1 realizados por nuestro grupo de investigación han demostrado la capacidad inmunoestimulante del PG aplicado al momento del secado en glándulas mamarias (GM) bovinas no infectadas, el efecto inmunoprotector frente a una IIM no sido estudiado.El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto inmunoprotector del PG frente a una infección experimental por Staphylococcus aureus (S. aureus) en GM murina mediante el análisis del perfil de infección bacteriana y la cuantificación del número de monocitos-macrófagos por IHQ. Para ello, se utilizaron dos grupos de ratones cepa BALB/cJ en lactancia que fueron inoculados en forma intramamaria (IM) con 100 µl de extracto de PG (50mg/ml) (Grupo I) y con 100 µl de solución fisiológica (SF) (Grupo II). A las 72 hs post-inoculación (PI), ambos grupos fueron infectados con una dosis de 1x105 UFC/glándula de S. aureus. Paralelamente, un tercer grupo de ratones fue inoculado solamente con la misma dosis bacteriana (Grupo III). A las 6, 24, 48, 72 y 96 hs post-infección (pi) se extrajeron las GM y se las dividió en 3 porciones para realizar diferentes técnicas.Para determinar el perfil de infección generado y el clearance de la bacteria en la GM se cuantificó el número de unidades formadoras de colonias (UFC) recuperadas/glándula a distintos tiempos pi por el método de dilución y siembra en placa de agar-base. Otras porciones de tejido se procesaron mediante técnicas histológicas de rutina para la realización de IHQ empleando un anticuerpo específico para monocitos-macrófagos (anti-CD14). Las células CD14 positivas fueron identificadas debido a una marcación citoplasmática de color marrón dada por el cromógeno utilizado (diaminobencidina). Para la cuantificación de monocitos-macrófagos se digitalizaron campos microscópicos que cubrieron toda el área a analizar en un aumento de 40x, tomándose entre 30 y 40 imágenes por corte histológico y obteniéndose el número de células positivas por unidad de área (mm2). La especificidad del anticuerpo primario utilizado en IHQ se corroboró mediante western blot en muestras de tejido mamario murino homogenizado.La evaluación estadística de los datos obtenidos se realizó por ANOVA factorial. Este análisis evalúa los efectos individuales del tratamiento (T) y del tiempo de muestreo (t) así como de la interacción entre ambos factores (Txt), utilizando el programa SPSS. En cuanto a la evaluación del perfil de infección, el número de UFC recuperadas de la GM fue menor en los ratones tratados con PG e infectados con S. aureus (Grupo I) en comparación con el número de UFC recuperadas de las GM de los Grupos II y III (p