“Evaluación de la proliferación celular de quistes ováricos inducidos en dos modelos experimentales”.

SALVETTI NR; BARAVALLE C; FULLANA L; MÜLLER LA; LORENTE JA; GIMENO EJ; ORTEGA HH

La Plata, Buenos Aires.

Congreso; IV Reunión Argentina de Patología Veterinaria.; 2004

Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata.

Los quistes foliculares ováricos son un importante trastorno que afecta la fertilidad de muchas especies de interés zootécnico. Se han desarrollado numerosos modelos para el estudio de esta enfermedad en la rata, ya que esta especie presenta parámetros reproductivos, biológicos y endócrinos conocidos. Entre los modelos desarrollados, se encuentran varios que implican el uso de hormonas esteroideas, como por ejemplo, valerato de estradiol, dehidroepiandrostenediona, etc, mientras que otros involucran factores ambientales que provocan estrés como la exposición a luz permanente, a sonidos agudos durante períodos prolongados, etc. En el presente estudio se analizó, mediante inmunohistoquímica, la proliferación celular en la pared de quistes foliculares inducidos mediante dos modelos: exposición a luz permanente y androgenización neonatal. Se utilizaron 18 ratas, de la cepa Wistar, divididas en dos grupos experimentales y un grupo control:. Grupo I: hembras de 1 día de vida, las cuales fueron inyectadas con 10 mg de propionato de testosterona (Testonort ®) permaneciendo luego bajo condiciones ambientales controladas hasta el momento del sacrificio, a las 16 semanas de edad; Grupo II: hembras de 10 semanas de edad sometidas a un ambiente con luz permanente durante un período de 15 semanas, con sacrificio de aquellas que presentaron citología vaginal de estro por un período de 10 días consecutivos; Grupo III: (control), hembras de 16 semanas de edad, con sacrificio cuando presentaron citología vaginal de proestro. Luego del sacrificio se extrajeron los ovarios, los que fueron fijados en formol bufferado al 10 % y procesados de acuerdo a protocolos histológicos de rutina hasta llegar a tacos de parafina. Se hicieron cortes seriados de 5 µm y luego se procedió a realizar técnicas de inmunohistoquímica (se usó el método streptavidina-peroxidasa y como cromógeno diaminobencidina) para detectar PCNA (proliferation cell nuclear antigen, clon PC-10). Para realizar la valoración de los preparados se utilizó el software Image Pro-Plus 3.0.1. Las imágenes fueron digitalizadas con una cámara de video color CCD montada sobre un microscopio de luz convencional Olympus BH-2, usando lentes objetivos de x40. Tomando como patrón la intensidad de núcleos positivos de los controles se cuantificó el porcentaje de células positivas sobre el total de células (índice de proliferación) en cada una de las capas de la pared folicular (granulosa, teca interna y teca externa). Luego se sometieron los datos al análisis estadístico ANOVA seguido de test de Duncan. En los folículos normales las células intensamente inmunomarcadas se encontraron en la zona basal de la capa granulosa. Cabe destacar que en la capa granulosa de los folículos quísticos las células se encontraban desorganizadas, con presencia de cuerpos apoptóticos y, en algunos quistes, la granulosa estaba ausente. El índice de proliferación con PCNA en esta capa fue mayor (p<0,05) en los folículos antrales terciarios de los animales del grupo control (7,93 +/- 1,66 %) con respecto a los folículos quísticos tanto en el Grupo I (3,13 +/- 2,39 %) como en el Grupo II (2,03 +/- 0,95 %). Con respecto a las tecas, también hubo diferencias (p<0,05) entre el grupo control (teca interna: 10,85 +/- 1,94 %; teca externa: 3,16 +/- 1,68 %) con los tratados (Grupo I: teca interna: 3,49 +/- 1,72 %; teca externa: 0,29 +/- 0,50 %. Grupo II: teca interna: 5,59 +/- 1,95 %; teca externa: 0,87 +/- 1,24 %). La escasa proliferación encontrada en la pared folicular en estos dos modelos experimentales coincide con los datos encontrados por diversos autores, en quistes foliculares espontáneos de bovinos. Estas estructuras anormales persisten en el tiempo y, por lo tanto, es posible que sus células no estén en período de proliferación sino más bien en reposo e incluso en vías de desaparición. La desorganización y presencia de cuerpos apoptóticos en la capa de células de la granulosa sugiere el hecho de que éstas estén degenerando tal como ocurre durante el proceso de atresia. En conclusión, los cambios morfológicos observados durante la formación de quistes foliculares estarían asociados a una proliferación celular disminuida y a una degeneración celular similar a la encontrada en los folículos atrésicos.