Expresión de IGF-I (Insulin-Like Growth Factor-I) en ovarios de bovinos con la enfermedad quística ovárica

ACOSTA JC; PALOMAR MM; MÜLLER LA; DALLARD BE; SALVETTI NR; ORTEGA HH

Santa Fe, Santa Fe

Jornada; IX Encuentro de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional del Litoral.; 2005

Introducción La enfermedad quística ovárica (COD) es un importante desorden que se produce en el ganado bovino y ha sido definida como la persistencia de una estructura folicular anovulatoria (mayor a 20 mm), en ausencia de tejido luteal; por un período de 8 días o mas. Se sabe que es producida por una alteración endocrina en el eje hipotálamo-hipófisis-ovárico. Aunque los quistes foliculares han sido estudiados extensamente, particularmente en relación a su diagnóstico y tratamiento, en la actualidad se conoce relativamente poco acerca de los mecanismos que causan su desarrollo. Numerosos estudios demuestran que el sistema de IGF (Insulin-like Growth Factor) regula el crecimiento folicular,  actúa en la función del cuerpo lúteo y refuerza las acciones de las gonadotrofinas en los ovarios de varias especies. El IGF está constituido por tres ligandos: insulina, IGF-I e IGF-II, sintetizados principalmente en células de la teca; tres receptores de alta afinidad (IGF-IR, IGF-IIR, e insulina-R) y seis  proteínas ligadoras (IGFBP-1 a -6). El IGF-I en ciertas especies de mamíferos, estimula la proliferación y diferenciación de las células tecales y granulosas in vitro  y también se ha demostrado que, en el bovino, existe un efecto sinérgico entre IGF-I y LH en la esteroideogénesis en las células de la teca, actuando también aditivamente con FSH como un regulador autocrino del crecimiento de células granulosas bovinas y como un regulador paracrino de la proliferación celular en ausencia de FSH. En bovinos, ovejas y cerdo, el crecimiento folicular y regresión se asocia con cambios en los niveles de IGFBP mas que con cambios en IGF-I o II. La  comprensión de los mecanismos de control implicados en el  crecimiento folicular en ovarios bovinos es importante en el campo de la ciencia de la lechería y contribuirá a esclarecer la intimidad de los procesos que ocurren durante el desarrollo de la COD. El objetivo del presente trabajo es identificar las variaciones en la expresión de IGF-I en folículos quísticos de animales con COD comparados con los folículos terciarios de animales normales mediante técnicas de inmunohistoquímica así como también mediante la medición en líquido folicular de este factor de crecimiento. Materiales y métodos: Se procedió a la recolección de ovarios de bovinos provenientes de frigoríficos, que presentaban alteraciones macroscópicas en el desarrollo folicular, como así también ovarios provenientes de vacas sanas, los que fueron utilizados como control. Se evaluaron folículos terciarios antrales en los ovarios normales y folículos quísticos en animales con COD. Se extrajo el líquido folicular de los folículos terciarios y quísticos para realizar el análisis de los niveles de IGF-I. Las muestras de tejido fueron fijadas en formol bufferado al 10% y procesadas de acuerdo a técnicas histológicas de rutina hasta la inclusión en parafina. Luego se obtuvieron cortes seriados de 5 um de espesor sobre los que se realizaron técnicas de inmunohistoquímica para detectar IGF-I. En todos los casos, se realizó recuperación antigénica en microondas. Las inmunomarcaciones se efectuaron mediante el sistema streptavidina-biotina-peroxidasa; se utilizó como cromógeno diaminobencidina y como coloración de contraste Hematoxilina. El análisis de los preparados fue efectuado utilizando el sistema Image Pro-Plus 4.1.0.1® (Media Cybernetics, Silver Spring, MA, USA), conectado a una PC Pentium IV Intel. Las imágenes fueron generadas a través de una cámara de video Sony ExwaveHAD, conectada a un microscopio Olympus CH2 con fuente de energía estabilizada. Se utilizaron lentes objetivas planocromáticas de 4, 10, 40 y 100 aumentos. La evaluación de las áreas inmunomarcadas (IHSA) se efectuó mediante un análisis de segmentación de colores en los tonos e intensidades correspondientes a las áreas de reactividad del cromógeno utilizado, concordante con lo observado en los controles positivos. Resultados: En el líquido folicular extraído se encontraron diferencias significativas en los niveles IGF: Folículos Quísticos: 57.94+/-18.52 ng/ml comparado con Folículos Terciarios: 104.70+/-47.28 ng/ml. El IGF-I se detectó mediante IHQ en el citoplasma de las células de la granulosa y de ambas tecas (interna y externa), tanto en los folículos terciarios como quísticos. Se encontraron los siguientes resultados en donde se muestra una diferencia significativa en la expresión de IGF-I a nivel de la capa de células de la granulosa entre ambos tipos de folículos: Granulosa Teca Interna Teca Externa Folículos Quísticos 1,91+/-2,46* 4,17+/-4,32 2,09+/-3,05 Folículos Terciarios 3,81+/-3,19* 5,67+/-5,02 2,57+/-4,60 Discusión: De acuerdo con nuestros resultados, IGF-I se expresa con mayor intensidad en las células de la granulosa de los folículos terciarios, dando respuesta a la participación de IGF-I a nivel granulosa en la amplificación de la respuesta de dichas células a la FSH. Basándonos en la bibliografía consultada, y corroborando con otras investigaciones, se demuestra que en folículos terciarios hay mayor expresión de estos factores ratificando la mayor actividad ovárica en contraste con la posible falta de función en los folículos quísticos. Así mismo, chequeando los valores intracelulares de IGF-I en folículos terciarios, los niveles de IGF-I en líquido folicular de estos son mayores que en los folículos quísticos, lo que nos permite suponer que los niveles de IGF en líquido folicular se relacionarían con la actividad ovárica.