Desarrollo de un ELISA indirecto para la evaluación de inmunogenicidad de un biofármaco en ratas

MARELLI, B.E.; ZAYAS, M.; SANTIAGO, G.M.; ORTEGA, H.H.

Esperanza, Santa Fe

Jornada; VIII Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión de la Facultad de Ciencias Veterinarias; 2020

Facultada Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

Los biofármacos son una clase importante de medicamentosutilizados para tratar una amplia variedad de enfermedades en humanos. Cientosde ellos se encuentran actualmente en diferentes etapas de ensayos clínicos, oya han sido aprobados, lo que demuestra su inmenso potencial para mejorar la evoluciónde los pacientes 1,2. Los mecanismos de acción para la actividadfarmacológica de estas moléculas son diversos. Dentro de los más relevantespodemos mencionar el bloqueo de la actividad de una proteína desregulada, eldireccionamiento de una toxina hacia las células de una enfermedad, laestimulación de una vía metabólica específica, entre muchos otros. Por otraparte, es conocido que los biofármacos, en su mayoría moléculas de naturaleza proteica,pueden provocar una respuesta inmune en los pacientes tratados, generandoanticuerpos ?anti-drogas? que pueden unirse a diferentes epítopes del mismo3.En particular, cuando estos anticuerpos son específicos para ciertas regiones relevantespara su actividad farmacológica podrían provocar su inhibición o neutralizacióncompleta4,5, afectando el efecto biológico y su eficacia clínica. Enel presente trabajo se evaluó la inmunogenicidad de un nuevo biofármaco enestudio (denominación y estructura protegida por confidencialidad) mediante eldesarrollo de un ELISA (Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas) indirecto.Para ello se utilizaron 4 grupos experimentales de ratas (grupos A, B, C y D) alos cuales se les administraron 3 dosis diferentes del biofármaco en estudio (grupoA: 3 mg/kg, grupo B: 1,5 mg/kg y grupo C: 0,75 mg/kg) o solución salina (grupoD, control negativo), en un volumen constante. Todos los grupos fueron tratados3 veces por semana, durante 4 semanas. Como control positivo se utilizaron sueroshiperinmunes de ratas específicos para el biofármaco en estudio, generadosmediante un esquema de inmunización a dosis repetidas más adyuvante de Freund. Durantela etapa de desarrollo del ELISA, se analizaron y validaron diferentescondiciones del ensayo en lo que respecta a las concentraciones de losanticuerpos utilizados y los tiempos de incubación empleados en cada etapa dela técnica. Una vez optimizada, la metodología fue utilizada para determinar lapresencia de anticuerpos ?anti-biofármaco? en el suero de las ratas de losdistintos grupos experimentales. Los resultados obtenidos fueron expresadoscomo: (1) porcentaje de reactividad (%) de las muestras calculado en relaciónal suero control positivo (suero hiperinmune) y (2) el título, calculado comola inversa de la dilución más alta que arrojó una lectura de DO450nmpor arriba del límite de corte (LC). El LC se calculó tomando el valor promediode las DO450nm de los animales del grupo D en diluciones predeterminadasmás 2 desviaciones estándar (promedio ± 2 DS)6. Como resultadopodemos mencionar que en todas las dosis evaluadas se observó una altainmunogenicidad del biofármaco, siendo mayor en los animales del grupo A. Enconclusión, se desarrolló un ensayo de ELISA sensible y específico para elanálisis de la inmunogenicidad de un fármaco de origen biotecnológico, comoprueba complementaria a la evaluación toxicológica de seguridad. Este ensayorepresenta una herramienta de gran utilidad que podría ser aplicada adiferentes proteínas que se analicen como candidatos terapéuticos en medicinahumana y veterinaria.