Desarrollo y validación de metodología analítica para identificar y cuantificar tulatromicina en diferentes matrices de bovino, por cromatografía líquida de alta performance en tandem con ionización por electrospray y detección por espectrometría de masas

ANGELI, E; HEIN, GJ; ADDONA, S; ORTEGA, HH; BARCAROLO, D; SALVETTI, NR

Esperanza (Santa Fe)

Jornada; VIII Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión; 2020

Facultad de Ciencias Veterinarias (Universidad Nacional del Litoral)

La tulatromicina es un agenteantimicrobiano macrólido semisintético, perteneciente a una serie deantibióticos macrocíclicos tribásicos que se han denominado triamilidas. Losmacrólidos son antibióticos bacteriostáticos e inhiben la biosíntesis deproteínas bacterianas esenciales, por medio de su unión selectiva al ácidoribonucleico ribosómico (ARNr). Actúan estimulando la disociación del peptidil-ARNrdel ribosoma durante los procesos de translocación. La tulatromicina poseeactividad in vitro contra: Mannheimia (Pasteurella) haemolytica,Pasteurella multocida, Haemophilus somnus, Actinobacilluspleuropneumoniae, Pasteurella multocida y Mycoplasma hyopneumoniae,que son las bacterias patógenas más comúnmente asociadas a las enfermedadesrespiratorias del ganado bovino y porcino, respectivamente [1, 2]. El ServicioNacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA), mediante la resoluciónN° 559 del año 2011, aprobó los límites máximos de residuos (LMR) en alimentosde origen animal. Dichos LMR resultan necesarios para establecer los períodosde retiro de los productos veterinarios, que se deben respetar para que losalimentos provenientes de animales tratados resulten seguros y no genereninconvenientes a la Salud Pública [3]. En cuanto al compuesto en estudio, elprincipal residuo marcador es el metabolito: (2R, 3S, 4R, 5R, 8R, 10R, 11R,12S, 13S, 14R) -2-etil-3,4,10,13-tetrahidroxi-3, 5,8,10,12,14-hexametil-11 ? [[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino) -β-D-xilohexopiranosil] oxi] -1-oxa-6-azaciclopentadecan-15-ona,también conocido como CP-60,300; producto de la hidrolisis de la tulatromicinay sus metabolitos.El objetivo de este trabajo fue desarrollary validar una metodología analítica para identificar y cuantificartulatromicina en diferentes tejidos de bovinos: hígado, riñón, músculo, sitiode inyección y grasa, por cromatografía liquida de alta performance en tandemcon ionización por electrospray y detección por espectrometría de masas/masas(LC ESI MS/MS). La validación se define como el proceso de asegurar que unmétodo analítico sea capaz de brindar resultados confiables con precisión yexactitud aceptables. Para validar una metodología analítica se utilizan lascifras de mérito con el propósito de calificar un determinado método y compararsus propiedades analíticas con las provistas por otras técnicas [4]. Las cifrasde mérito estudiadas fueron: Selectividad (Especificidad) / Linealidad y rango/ Límite de Detección / Límite de Cuantificación / Precisión / Exactitud(Veracidad) / Robustez.Se utilizó un cromatógrafo líquido de ultra alta velocidad Shimadzu que consta dedos bombas binarias, un desgasificador y un muestreador automático SIL-20AC XRcon horno para calentamiento de columna. La separación cromatográfica serealizó en una columna analítica Shimadzu Shim-pack GIST C18 (3,0 µm, 100 mm x4,0 mm) provista de una columna de protección Shimadzu-pack GIST (G) C18 (3,0µm, 4,0 x 10 mm) y termostatizada a 35 °C. La detección y cuantificación selograron mediante el uso de un espectrómetro de masas triple cuadrupolo QTrap3200 (AB Sciex) equipado con una fuente de iones por electrospray (ESI). La metodología analítica consistió en la homogeneización de la muestra con ácido clorhídriconominal 2 mol/L y acetato de etilo, seguido del calentamiento de la fase acuosaresultante para hidrolizar la tulatromicina y sus metabolitos en el residuomarcador CP-60,300. Luego se realizó una limpieza mediante extracción en fasesolida (SPE) con un cartucho de intercambio catiónico, seguido de laevaporación del eluato bajo corriente de nitrógeno y posterior reconstituciónen metanol/agua (1:1) para luego analizar mediante inyección directa por LC ESIMS / MS. Se utilizó un estándar interno perteneciente a la familia de latulatromicina para normalizar las pérdidas durante el tratamiento de muestras. Las cifras de méritos estudiadas cumplieron con los criterios de aceptación establecidos por los organismos regulatoriosde referencia consultados, lográndose desarrollar y validar una metodología analítica para identificar y cuantificar tulatromicina en diferentes tejidos debovinos. El desarrollo y validación de una metodologíaanalítica, por LC ESI MS/MS, para la determinación de tulatromicina en diferentes tejidos bovinos, permitirá abordar estudios de productos veterinarios que requieran establecer el período de retiro de los animales, a fin de garantizar laseguridad de los alimentos y no generar inconvenientes a la salud pública.