Evaluación de la expresión y actividad de metaloproteasas de la matriz en la glándula mamaria bovina y su relación con la persistencia de las infecciones por Staphylococcus aureus durante la involución

CHERVAZ V; SILVESTRINI P; PIROLA SI; BECCARÍA C; ANDREOTTI C; PEREYRA EAL; CALVINHO LF; RENNA MS; BARAVALLE C; VELÁZQUEZ NS; DALLARD BE

La Plata

Otro; V Reunión Anual de la Red Latinoamericana de Investigación en Mastitis (RELIM).; 2019

Red Latinoamericana de Investigación en Mastitis

Introducción Staphylococcus aureus es el patógeno más frecuentemente aislado en casos de mastitis. Causa infecciones intramamarias (IIM) con tendencia a la cronicidad (Aitken y col., 2011). La glándula mamaria (GM) bovina es altamente susceptible a las nuevas IIM durante la etapa temprana del periodo de involución; que se caracteriza por una intensa remodelación tisular que implica la degradación de la matriz extracelular (MEC) y regeneración del tejido adiposo (Norgaard y col., 2008). Las metaloproteasas de la matriz (MMPs) son enzimas que escinden selectivamente sustratos como los de la MEC y péptidos de quimioquinas, actuando durante la remodelación de los tejidos y el daño tisular asociado a la inflamación. Las MMPs más estudiadas son MMP-2 y MMP-9 y su actividad está regulada por inhibidores tisulares de metaloproteasas (TIMPs). La principal fuente de MMPs en la GM son los neutrófilos y macrófagos (Raulo y col., 2002). Los objetivos de este trabajo fueron: evaluar la expresión proteica de MMP-2 y MMP-9 y sus inhibidores (TIMP-1 y TIMP-2) en tejido mamario de cuartos sanos e infectados con S. aureus durante la involución activa. Evaluar la actividad gelatinolítica de MMP-2 y MMP-9 en secreción mamaria. Evaluar el porcentaje de células mononucleares (CMN) CD14+ presentes en sangre y secreción de animales sanos e infectados crónicos por S. aureus.Materiales y MétodosSe utilizaron vacas Holando Argentino. La unidad experimental fueron los cuartos mamarios libres de IIM (n=15) y con IIM crónicas por S. aureus (n=15). Se definió como IIM crónica al aislamiento del mismo organismo a partir de tres muestras consecutivas a intervalos de 21 ds. Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 ds luego del último ordeño. Muestras provenientes de cuartos sanos (n=5) e infectados crónicos por S. aureus (n=5) fueron incluidas en cada grupo (7, 14 y 21 ds). La identificación en tejido mamario de las enzimas MMP-2 y MMP-9 y de sus inhibidores (TIMP-1 y TIMP-2) se realizó por inmunohistoquímica. Por otro lado se determinó la actividad enzimática de MMP-2 y MMP-9 en secreciones mamarias provenientes de cuartos sanos e infectados mediante zimografía. Las muestras de secreción se obtuvieron inmediatamente antes del secado (hora 0), a las 12 hs y al día 1, 2, 3, 4, 5, 7, 14 y 21 post secado. También se evaluó el porcentaje de CMN presentes en sangre y secreción mamaria de animales sanos e infectados crónicos por S. aureus mediante inmunomarcación y adquisición por citometría de flujo (Attune, A24860). Resultados La inmunomarcación para MMP-2, MMP-9, TIMP-1 y TIMP-2 se asoció al citoplasma de células epiteliales alveolares y conductos excretores del parénquima mamario, tanto en cuartos sanos como en cuartos infectados. Asimismo, en el estroma interalveolar y en el interior de conductos y alvéolos se observaron macrófagos y neutrófilos con su citoplasma inmunoreactivo para las diferentes proteínas evaluadas. La expresión de MMP-2 se vio influenciada por el proceso infeccioso (p