VALIDACIÓN DE TÉCNICAS CON MICROVOLÚMENES PARA EL DOSAJE DE BIOMARCADORES ÚTILES EN PRUEBAS PRECLÍNICAS

SANTIAGO GM; ORTEGA HH; STASSI AF; CABAÑA ER; HEIN GJ

Esperanza

Jornada; VII Jornada de difusión de la investigación y extensión; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias (Universidad Nacional del Litoral)

El área Analítica del Centro de Medicina Comparada (ICIVET Litoral) cuenta con un subáreaespecífica (Bioquímica y Técnicas Generales) donde los profesionales realizananálisis bioquímicos y técnicas inmunológicas complementarias a los ensayos dealta complejidad efectuados. Para la evaluación de nuevos productosfarmacéuticos se requieren datos a partir de pruebas preclínicas a fines degarantizar que los beneficios de la nueva droga superen cualquier riesgopotencial. Los biomarcadores son parte del diagnóstico y monitoreo dediferentes enfermedades en modelos experimentales y en pruebas de concepto.También sirven como herramienta fundamental para el monitoreo de toxicidad denuevos fármacos. En este sentido, un biomarcador se define como una sustanciaproducida por un tejido específico que puede ser detectada en la circulación olos tejidos. Es importante además que sea liberado en una cantidad proporcionala la evolución del proceso patológico específico y proporcionar informaciónsobre la presencia, la gravedad y el pronóstico de la injuria. Losbiomarcadores bioquímicos se han utilizado durante mucho tiempo para dilucidarlos cambios fisiológicos, toxicológicos, farmacológicos o para llenar losvacíos de incertidumbre acerca de la patogenia de las enfermedades o lavariabilidad en la respuesta a fármacos1. Sin embargo, los bajosvolúmenes de muestras biológicas obtenidos de animales pequeños de laboratorio(por ejemplo ratas, ratones y conejos) limitan la posibilidad de llevar a cabométodos comerciales. Por lo tanto, uno de los objetivos del subárea, como partede una tesis doctoral, fue desarrollar y validar una plataforma de análisis debiomarcadores bioquímicos utilizando micro volúmenes (menos de 50 µL de suerototal) para diseñar paquetes de biomarcadores útiles en ensayos preclínicos.Todas las técnicas analíticas se desarrollaron bajo un Sistema de Gestión deCalidad certificado ISO 9001 de acuerdo con los principios de Buenas Prácticasde Laboratorio ya el CMC cuenta con el reconocimiento de BPL-OECD otorgadopor el Organismo Argentino de Acreditación (OAA). Se tomaron muestras de sangrede ratas, ratones y conejos y se cuantificaron las concentraciones séricas deglucosa (Glc), triglicéridos (Tg), colesterol (Col), lipoproteína de alta (HDL)y baja densidad (LDL), proteínas totales (PT), albúmina (Alb), creatinina (Cr)y urea (U). Para estas técnicas se utilizaron los espectrómetros ultrarrápidosUV/Vis SPECTROstar Nano y CLARIOstar (BMG LABTECH GmbH, Alemania) y kitsbioquímicos comerciales (Wiener Labs, Argentina) diseñados para mayoresvolúmenes de suero de humanos. Las cifras de mérito analizadas fueron: límitede detección, límite de cuantificación, rango cuantificable, precisión intra einter-ensayo, exactitud, comparación entre laboratorios, linealidad dilucionaly estabilidad a -20 °C y -80 °C durante 60 días. Todas estas variables fueronanalizadas y validadas de acuerdo con la norma EMA sobre validaciónde métodos bioanalíticos y la Guía de la FDA para la industria:validación de métodos bioanalíticos. Eldesarrollo y validación de estas técnicas analíticas utilizando micro volúmenescontribuye a la ejecución de ensayos preclínicos en especies pequeñas,reduciendo la cantidad de sustancia de prueba necesaria y agregando complejidada los estudios realizados. Este desarrollo también establece un marcocientífico que permite dilucidar los cambios fisiopatológicos en diferentesmodelos animales para el estudio de daños subclínicos ocurridos en ciertosórganos, como el hígado, el páncreas, los riñones y el corazón, que no sondetectables por otras técnicas como la patología. Además, las reducciones delos volúmenes de muestras y reactivos concuerdan con el principio de las 3R´s yla sustentabilidad.