Identificación de variedades de olivo introducidos en Argentina mediante microsatélites con cebadores modificados

TORRES, R; FERRER, S; MASUELLI, R.W.

Mar del Plata Argentina.

Congreso; XXXI Congreso Argentino de Horticultura; 2008

Asociación de Horticultura Argentina

Para la identificación de variedades existen distintas técnicas que se enmarcan en dos grandes grupos, unas basadas en descriptores morfológicas y otras en marcadores moleculares. Las del primer grupo son muy laboriosas, requieren de ensayos estadísticos a campo y pueden estar altamente influenciados por el ambiente. Los segundos, son inalterables por el ambiente y su complejidad y reproducibilidad varía de acuerdo al tipo de marcador empleado El avance en el conocimiento del genoma del olivo ha permitido el desarrollo de marcadores microsatélites (Simple Sequence Repeat, SSR) que son altamente reproducibles y confiables, aunque muy costosos si se quiere estudiar un alto número de loci. Para disminuir los costos, propone una modificación de la técnica en la que emplea simultáneamente tres cebadores en una misma reacción de amplificación por PCR. Estos cebadores son: 1- el cebador 3´-5´ secuencia-específica del SSR, 2- el cebador 5´-3´secuencia-específica al que se le ha incorporado en su extremo 5´una secuencia de 18 pb llamada M13(-21) y, 3- la secuencia 5´-3´ M13(-21) marcada con fluorocromo. Esta modificación permite resolver las bandas en un secuenciador, combinar reacciones que amplifican distintos loci y marcar con fluorocromo solo el cebador M13(-21) sin que sea necesario marcar cada par de microsatélites. El propósito de este trabajo fue conocer, mediante la técnica de microsatélites modificada, la variedad a la que pertenecían 61 muestras provenientes de un antiguo olivar implantado en el sur de Argentina.