Corrientes aniónicas AMPc-dependientes en células K562 salvajes y resistentes a vincristina

ASSEF Y., CAVARRA MS., DAMIANO A., IBARRA C., KOTSIAS BA.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC, SAI, SAFE, SAB (Biofísica), SAN (Biología), SAN y SAF

En este trabajo estudiamos la función de las proteínas ORCC (canal de cloruro con rectificación saliente) y CFTR (regulador transmembrana de la fibrosis quística) en células K562 salvajes (K562WT) y resistentes a vincristina (K562Vinc). La expresión de los genes que codifican para CFTR y MDR-1 (multidroga resistencia) se evaluó por RT-PCR semicuantitativa. El ARNm de MDR-1 aumentó ~20 veces en las células K562Vinc con respecto a las salvajes, mientras que no se observan cambios en los niveles de CFTR. La actividad de los canales ORCC y CFTR fue estudiada con técnica de patch clamp en configuración de célula entera. La forskolina (40 mM), un activador de la adenilato ciclasa, incrementó las corrientes salientes en los dos tipos celulares. Los valores de conductancia  (0 to +80 mV) en  K562WT fueron: 0.47 ± 0.09 y 1.06 ±  0.24 nS en condiciones control y estimulada, respectivamente (p < 0.05, n=9). En las K562Vinc la conductancia control fue 0.32 ± 0.08 nS y 0.67 ± 0.15 nS después de la activación (p<0.05, n=12). El efecto de la forskolina fue evitado por exposición previa de las células a DPC (diphenylamine-2-carboxylate). Una fracción de las corrientes activadas por forskolina puede ser inhibida por 500 mM DIDS (4,4-diisothiocyanatostilbene-2,2-disulfonic acid) y la subsecuente adición de 500 mM DPC bloquea la fracción remanente. Los niveles de corrientes AMPc-dependientes y de inhibición son similares en los dos tipos celulares. El efecto de DIDS y DPC aplicados extracelularmente nos permite concluir que ~70% de la corriente estimulada en ambas líneas celulares sería transportada por canales ORCC y la remanente a través de CFTR.