xShroom1 regula el número de canales ENaC insertados en la membrana de ovocitos de Xenopus Laevis

GALIZIA L.; OZU M.; ASSEF YA.; MARINO GI.; OJEA A.; KOTSIAS BA.

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión de la Sociedad argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Shroom es una familia de proteínas asociadas al citoesqueleto de actina. xShroom1 se encuentra constitutivamente expresada en los ovocitos de Xenopus laevis y es requerida para la expresión de canales de sodio sensibles a amiloride (ENaC). Los ovocitos fueron inyectados con α, β y γ mENaC y con los oligonucleótidos xShroom sense o antisense. Utilizamos la técnica de clampeo de voltaje para estudiar las corrientes de sodio sensibles a amiloride (INa (amil)).Observamos una marcada reducción de las corrientes INa (amil) en los ovocitos inyectados con el antisense de xShroom1 (Ginward de -160 a 0 mV:36 ± 12 LS y 1.80 ± 0.50 LS con xShroom1 sense y antisense). Los ovocitos que expresan una mutante DEG de la subunidad β-mENaC (βS518K) con una probabilidad de apertura de 1, tienen una corriente incrementada que también se reduce al inyectar el antisense de xShroom1. La incubación con tripsina en bajas concentraciones, que activa canales ENaC residentes en membrana lleva a un incremento lento de la INa (amil) en ovocitos con xShroom1 sense pero no tiene efecto en los ovocitos coinyectados con antisense xShroom1. Realizamos inmunofluorescencias y no observamos presencia de αβγ-mENaC en la superficie membrana de los ovocitos inyectados con xShroom antisense. En experimentos preliminares observamos que el efecto negativo de la inyección con el antisense de xShroom1 puede ser restituido sólo en una pequeña fracción al incubar con forskolina que reduce la tasa de endocitosis de ENaC. Adicionalmente los tratamientos con inhibidores de la degradación de proteínas por la vía lisosomal (cloroquina) o proteosomal (MG-132) no incrementan las corrientes INa (amil) de los ovocitos inyectados con xShroom antisense. En conjunto estos resultados preliminares sugieren que la ausencia de la proteína xShroom1 reduce el número de canales ENaC en la membrana al afectar su tráfico y no su degradación.