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Se sabe que los fibroblastos asociados a carcinomas (CAF) participan en el crecimiento tumoral, pero poco se conoce de su rol en la adquisición de la hormono-independencia en cáncer de mama. Contamos con carcinomas mamarios murinos hormono-dependientes (HD) mantenidos por transplante sc en ratones tratados con progestágenos y sus variantes hormono-independientes (HI). Hemos desarrollado cultivos primarios de ambos tipos tumorales pudiendo separar los CAF y las células epiteliales tumorales (EPI). Previamente observamos que los CAF del tumor C4-HI (CAF-HI) son más estimulatorios que los CAF del tumor C4-HD (CAF-HD). El objetivo del trabajo fue a) estudiar qué población celular prolifera en el co-cultivo, b) evaluar si los CAF-HI activan RP de células EPI y c) evaluar si los CAF-HI inducen una mayor activación de RP de las EPI que los CAF-HD. Usando cultivos puros de EPI-HI o mixtos, mantenidos por 48hs con 1% de suero fetal bovino charcolizado, demostramos que las EPI (citokeratina positivas) incrementaron sólo en presencia de CAFHI (p<0.05). Por otro lado en forma similar se hicieron cultivos EPIHD o EPI-HI puros o mixtos con CAF-HD o HI y las células fueron procesadas para Western blots y para ensayos de Mobility gel shift (EMSA). Se normalizaron los extractos celulares por nivel de expresión de cadherina E (marcador epitelial). Estudios de EMSA sugieren una mayor activación del RP cuando EPI-HD o HI fueron co-cultivadas con los CAF-HI. Se repitieron los experimentos usando EPI-HI puro vs EPI-HI con CAF-HI y un análisis detallado de los mismos, indicaría una prevalencia en la activación del heterodímero AB del RP en los co-cultivos (p<0.05). Este resultado fue consistente con un aumento en la fosforilación de la ser190 de la isoforma B del RP (p<0.05). Estos resultados sugieren la participación de los CAF-HI en el fenotipo hormono-independiente, induciendo una activación preferencial de la isoforma B del receptor de progesterona.

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