PRODUCCIÓN Y ANÁLISIS DE NARANJO DULCE TRANSGÉNICO UTILIZANDO DIFERENTES ESTRATEGIAS PARA OBTENER RESISTENCIA AL VIRUS DE LA PSOROSIS DE LOS CÍTRICOS (CPsV)

ZANEK, M.C., REYES, C.A., PEÑA, E. J., PLATA, M.I., COSTA, N., GRAU, O. Y M.L. GARCIA

Códoba, Argentina

Congreso; XIII Congreso Latinoamericano de Fitopatología. III Taller de la Asociación Argentina de Fitopatólogos; 2005

Asociación Argentina de Fitopatólogos

Psorosis es una enfermedad que afecta a todos los cítricos en Argentina y Uruguay, causando considerables pérdidas económicas. El agente causal, Citrus psorosis virus (CPsV), posee cuatro genes, la polimerasa (280K), las proteínas 24K y 54K de función desconocida y la proteína de la cápside (CP) o 48K. El objetivo de este trabajo es obtener Naranjo dulce transgénico resistente a la Psorosis aplicando dos estrategias diferentes. Se transformaron segmentos internodales de tallos jóvenes de Naranjo Dulce Pineapple, con A. tumefaciens con diferentes plásmidos binarios. Los brotes regenerados se seleccionaron por reacción GUS, o por GFP, y se injertaron in vitro sobre un pie de Citrange Troyer. Las plántulas se analizaron por PCR (presencia del gen viral), y luego se injertaron sobre Limón Rugoso. Se analizaron por Southern y Northen blot, y TAS-ELISA. Algunas de las líneas establecidas fueron multiplicadas por injerto para futuros experimentos de desafío. Además, se realizaron construcciones tipo “hairpin” inductores fuertes del silenciamiento génico viral. Se han analizado 9 líneas transgénicas CP, las que poseen entre 1 y 3 copias integradas del transgen. El nivel de expresión de la proteína fue variable y por debajo de la expresión del cítrico infectado. No se encontró correlación entre el número de copias del transgén, la expresión de mensajero y de la proteína. Varias líneas CP serán desafiadas con CPsV y evaluada su resistencia. Otras 10 líneas conteniendo el gen 54K y 10 mas con el gen 24K están siendo analizadas. Se obtuvieron las construcciones hpCP, hp54 y hp24 (tipo hairpin) como segunda estrategia para evaluar el nivel de tolerancia al virus. Con estas estrategias se pretende obtener un nivel de tolerancia satisfactorio ante la inoculación por injerto con material infectado en las condiciones de invernáculo