Búsqueda de actividad supresora en el virus de la Psorosis de los cítricos: optimización de un sistema transitorio para la inducción y ruptura del PTGS

EDUARDO J. PEÑA, CARINA A. REYES, MARÍA C. ZANEK, OSCAR GRAU, Y MARÍA L. GARCÍA

BUENOS AIRES

Congreso; BAIRESBIOTEC2005; 2005

La Psorosis de los cítricos es una epidemia en Argentina y Uruguay. Su agente causal, Citrus psorosis virus (CPsV), esta constituído por tres RNAs de simple cadena y polaridad negativa y es la especie tipo de un nuevo género, Ophiovirus (Milne et al., 2003). El RNA1 posee dos marcos de lectura, uno codifica para la polimerasa viral (280K), y otro más pequeño de función desconocida (24K). El RNA 2 codifica una proteína (54K) cuya función se desconoce y el RNA 3 codifica la proteína de cubierta (48K, CP). En las plantas, el PTGS es un mecanismo natural de defensa disparado contra agentes virales y otros ácidos nucleicos extraños o patogénicos. De inducirse, los RNAs virales son degradados a fragmentos de 21-23 nt llamados siRNAs (small intereference RNAs) y la planta adquiere resistencia al virus. Una estrategia eficiente para disparar el PTGS es mediante construcciones capaces de expresar RNA de doble cadena (dsRNA) considerado como un fuerte inductor del PTGS. Esto se logra mediante vectores binarios que contienen parte de la secuencia del gen a silenciar insertada en sentido y antisentido, separados por un intrón. De esta manera, en la célula se sintetizan RNAs mensajeros que adoptan una estructura tipo hairpin, (Wesley 2001). La técnica se denomina ihpRNA (intron-spliced hairpin RNA). Se han identificado proteínas virales (denominadas supresoras del PTGS) que intervienen en diferentes pasos del PTGS, inhibiéndolo y permitiendo que el virus se multiplique y disemine. Entre varias supresoras, una de las más caracterizadas es la HcPro de Tobaco etch virus, capaz de romper o revertir el silenciamiento establecido. Para iniciar el estudio de la función supresora en CPsV hemos optimizado un sistema de inducción transitoria del PTGS para el gen marcador uidA, que es co-infiltrado con una construcción que expresa la proteína viral