Detección de Escherichia coli verocitotoxigénica en hortalizas de consumo directo.

COLELLO, ROCÍO; PADOLA, NORA L.; ETCHEVERRÍA, ANALÍA I.; PARMA, ALBERTO E.

Ciudad de Buenos Aires. Argentina

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología. VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología clínica (SADEBAC). I Congreso de Microbiología Agrícola y ambiental (DIMAyA); 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Escherichia coli verocitotoxigénica (VTEC) es considerado un patógeno emergente transmitido por alimentos, asociado a casos esporádicos o brotes de diarrea, colitis hemorrágica o síndrome urémico hemolítico. La principal característica de VTEC es su capacidad de producir y liberar verocitotoxinas (VT1 y VT2). Presenta también otros factores de virulencia como la intimina, codificada en el gen <i>eae</i> que media la adherencia de la bacteria al enterocito y un megaplásmido que contiene los genes para la síntesis de enterohemolisina (codificada en el gen <i>ehxA</i>), fimbrias de adhesión y adhesina autoaglutinante codificada por el gen <i>saa</i>.La mayoría de los casos de infección en el hombre se produce por ingestión de alimentos y agua contaminados. Los alimentos comúnmente asociados a brotes son: carne picada, salame, leche no pasteurizada, brotes de alfalfa, lechuga y sidra. Los brotes recientemente producidos por el consumo de hortalizas contaminadas por microorganismos patógenos, demuestran la vulnerabilidad de estos productos a la contaminación. El consumo de hortalizas se ha incrementado a raíz de las recomendaciones médicas que insisten en la necesidad de comer más hortalizas para prevenir enfermedades y  para mejorar la salud personal. Objetivos: Debido a la patogenicidad y morbilidad de VTEC para el hombre, y especialmente para la población infantil, y conociendo que las hortalizas pueden estar contaminadas, nos propusimos investigar la presencia de VTEC en hortalizas de consumo directo y caracterizar por técnicas de biología molecular las cepas VTEC aisladas.Materiales y Métodos: Se trabajó con 18 muestras de lechuga, repollo y remolacha procedentes de quintas de 2 ciudades de la Provincia de Buenos Aires. Se tomaron 10 gr de cada muestra y se cultivaron en 90 ml de agua de peptona (37ºC durante 18 hs con agitación). De cada cultivo de enriquecimiento se tomaron 1750µl que se centrifugaron a 2300 rpm, 4 min. Se tomaron 1350µl del sobrenadante y se centrifugaron a 13000 rpm, 3 min. El pellet se resuspendió en 34µl de agua bidestilada y 250 µl de chellex, se incubó 30 min a 65 ºC, se agitó con vórtex 10 seg y se hirvió 10 min para la extracción del ADN. Esta suspensión se utilizó para la detección de genes de virulencia de VTEC mediante la técnica de PCR-multiplex para la detección simultánea de los genes <i>vt1-vt2</i>. Los productos de amplificación de PCR se analizaron por electroforesis en geles de agarosa.Resultados: Una muestra de repollo y una de remolacha fueron positivas para <i>vt1-vt2</i>.La materia fecal de animales se usa como fertilizante del suelo mejorando la calidad a nivel nutricional de las hortalizas. La aplicación de materia fecal sin tratar puede presentar un riesgo de contaminación de hortalizas de consumo directo.Existe documentación limitada sobre la contaminación de hortalizas debido a la aplicación directa de materia fecal o abono derivado a los campos sembrados con éstas. Estos resultados representan un alerta en las prácticas de fertilización del suelo de las huertas e higiene y/o cocción de hortalizas ya que pueden ser potenciales vehículos de patógenos que implican un riesgo para la salud pública