Respuesta inmunitaria en ratón Balb/c inducida por la vacunación con ADN codificando la proteína Omp31 de Brucella melitensis.

CASSATARO, J. VELIKOVSKY, C.A. ESTEIN, S.M. VIZCAÍNO, N. CLOECKAERT, A. ZYGMUNT, M. SPITZ, M. BOWDEN, R.A. FOSSATI, C.A

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Microbiología; 2001

Asociación Argentina de Microbiología

RESPUESTA INMUNITARIA EN RATÓN BALB/C INDUCIDA POR LA VACUNACIÓN CON ADN CODIFICANDO LA PROTEÍNA OMP 31 DE Brucella melitensis J. Cassataro3, L. Bruno, C.A. Veilikovsky3, S.M. Estein1-2, N. Vizcaíno4, A. Cloeckaert5, M. Zygmunt5 , M. Spitz3, R.A. Bowden1 , C.A. Fossati3 rbowden@vet.unicen.edu.ar 1Lab. de Inmunoquímica y Biotecnología, Depto. de Sanidad Animal y Medicina Preventiva, Fac. de Ciencias Veterinarias, UNICEN, 7000 Tandil, Argentina; 2CIC, Bs. As, Argentina; 3IDEHU-CONICET, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA, Argentina; 4Depto. de Microbiología y Genética, Univ. de Salamanca, España; 5Lab. de Pathologie Infectieuse et Immunologie, INRA-Nouzilly, Francia. Las vacunas a ADN han mostrado inducir anticuerpos, células Th1 y Tc contra diversos microorganismos patógenos. En este trabajo se estudió la inmunogenicidad de OMP31 de Brucella melitensis. Para ello el cDNA de OMP31 fue clonado en el vector pCi, que contiene el promotor viral CMV para elevada expresión in vivo del gen de interés. La expresión ex vivo se controló por la transfección de células COS-7. Además se obtuvo la proteína purificada por cromatografía de afinidad a partir de cuerpos de inclusión inducidos en E. coli BL21 (DE3) transformada por Pet22+ codificando para OMP31. La expresión en COS-7 fue exclusivamente citoplasmática (Western blot con AcM anti-OMP31 y citometría de flujo). Se inmunizaron ratones BALB/c con (i) pCiOMP31, (ii) OMP31r en AFI, (iii) pCiOMP31 seguido de rOMP31 en AFI, (iv) pCi o (v) PBS (+AFI). Por ELISA, los ratones vacunados con OMP31r desarrollaron Ac IgG (log 10 3,80-5,01). Tras cuatro inyecciones de pCiOMP31 los títulos fueron menores que en el grupo precedente (log 10 2,30-3,20). Sin embargo, los ratones inyectados con pCiOMP31 y luego con OMP31r tuvieron niveles de Ac muy superiores (log 10 4,71-5,31). La inmunización con plásmido no privilegió ningún isotipo de Ac, mientras que tras la vacunación con la proteína y con la inyección plásmido-proteína predominó IgG1. Los resultados sugieren (i) la inyección de ADN induce eficazmente memoria inmunitaria y (ii) que el perfil inmunitario es de tipo Th2. Estas características son de interés para el desarrollo de vacunas contra B. ovis, que causa infecciones en las que los Ac y antígenos como OMP31 son actores principales.