Estudio de la interferencia serológica en el diagnóstico de la brucelosis bovina ocasionada por la administración de biológicos comerciales (modelo murino).

DÍAZ A.G.; SOTO P.; ESTEIN S.M.

Mercedes, Corrientes

Otro; XVIII Reunión Científico Técnica de la Asociación de Veterinarios de Laboratorio de Diagnóstico; 2010

Asociación de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico

ESTUDIO DE LA INTERFERENCIA SEROLÓGICA EN EL DIAGNÓSTICO DE LA BRUCELOSIS BOVINA OCASIONADA POR LA ADMINISTRACIÓN DE BIOLÓGICOS COMERCIALES (MODELO MURINO) A.G. Díaz 1,4; P. Soto2; S.M. Estein1,3 1 Laboratorio de Inmunología, Depto SAMP, F.C.V, U.N.C.P.B.A, Tandil. 2 Laboratorio de Microbiología Clínica y Experimental. Depto SAMP, F.C.V. U.N.C.P.B.A. Pinto 399 (7000), Tandil. 3 CONICET. 4 CIC. silmares@vet.unicen.edu.ar INTRODUCCIÓN En Argentina, el control de la brucelosis bovina se apoya en la vacunación obligatoria de las terneras con Brucella abortus cepa 19 entre los tres y ocho meses de edad, y en la detección y eliminación de los animales seropositivos con destino a faena. Las pruebas tamices oficialmente aceptadas en nuestro país son: BPA (prueba de aglutinación rápida en placa) y FPA (polarización de la fluorescencia). Ambas detectan anticuerpos (Ac) anti-cadena O del polisacárido (OPS), antígeno inmunodominante de la membrana externa, frente al cual aparecen los primeros anticuerpos séricos en los animales infectados con brucelas de campo o tras la vacunación con cepa 19. En ocasiones se han encontrado reacciones serológicas atípicas en bovinos adultos, en un contexto de ausencia de enfermedad clínica. Las probables causas son: la presencia de Ac residuales post vacunación o de reacción cruzada inducida por vacunas que incluyen cepas de bacterias Gram negativas (E. coli, Pasteurella spp., Haemophilus,. Salmonella spp., Moraxella, Campylobacter ) o por infecciones por estos microorganismos. Los objetivos del presente trabajo fueron: a) estudiar en el modelo murino la inducción de Ac generados por la vacunación con biológicos de aplicación en bovinos que pueden interferir en el diagnóstico de la brucelosis mediante el empleo de BPA, b) identificar los componentes responsables de la reacción cruzada mediante dot blot con las cepas constituyentes de las vacunas. MATERIALES Y MÉTODOS Ratones BALB/c hembra de 10 semanas de edad (n= 63) fueron distribuidos al azar en 12 grupos e inmunizados como se indica en la Tabla 1. Tabla 1: Vacunas y componentes Gr Vacuna Composición A Ganadera 4 SOM (1) C. fetus venerealis, C. fetus fetus, H. somnus, L. interrogans, Virus IBR, DVB B Agresinas 5 (1) P. multocida, P. haemolytica C Neumoenteritis 5 (1) Salmonella dublín, S. enteriditis, S. tiphymurium, P. multocida D IBR Querato L (1) Moraxella bovis, Virus IBR E Trivirus Neumovac Q (1) P. multocida, P. haemolytica, H. somnus, Moraxella bovis, Virus IBR, DVB, PI3; SR F Rinovac 4 (2) P. multocida, Virus IBR, DVB, PI3 G Calciomicina (3) Proteolisados de placenta. Min.- Vit. H Rotatec J5 (4) Rotavirus bovino, E. coli J5 I Bioabortogen H (4) Virus IBR, DVB, L. interrogans, C. fetus fetus, C. fetus venerealis, H. somnus J Biopoligen HS (4) P. haemolytica, P. multocida, H. somnus, Virus IBR, DVB, PI3, SR (1) Sanidad Ganadera; (2) Inmunovet; (3) Agroinco; (4) Biogénesis-Bagó La vacunación se realizó por la vía subcutánea con un volumen de 0,2 ml por ratón. El refuerzo se efectuó a los 25 días. Se incluyeron los grupos control K y L, vacunados con cepa 19 e inoculados con B. abortus 544, respectivamente. Se obtuvieron muestras de sangre a los 7, 15, 40, 50 y 60 días post inmunización. Los sueros fueron ensayados en la prueba BPA; para su realización se emplearon 16 microlitros de suero y 6 microlitros del antígeno. La lectura se efectuó a los 8 minutos. El dot blot se realizó sobre nitrocelulosa con las preparaciones de las cepas involucradas en la reacción cruzada. Se realizaron las incubaciones con los sueros de ratones, anticuerpo secundario anti-ratón conjugado a peroxidasa y revelado con alfa cloronaftol. RESULTADOS Tabla 2: Reaccionantes a BPA Grupo Días post inmunización 0 7 15 40 50 60 A (n=5) 0 0 0 0 0 0 B (n=6) 0 1 0 2 0 0 C (n=5) 0 0 0 1 0 0 D (n=5) 0 0 0 2 0 0 E (n=5) 0 2 0 1 0 0 F (n=5) 0 0 0 0 0 0 G (n=6) 0 0 0 0 0 0 H (n=5) 0 0 0 0 0 0 I (n=5) 0 3 0 0 1 0 J (n=5) 0 2 0 0 1 0 K (n=6) 0 4 6 6 6 6 L (n=5) 0 3 4 5 5 5 Las vacunas que indujeron anticuerpos de reacción cruzada fueron las que tenían como componentes a Pasteurella spp., Moraxella, Campylobacter y Haemophilus. El dot blot reveló que las cepas implicadas en la interferencia serológica eran las tres primeras. DISCUSIÓN Los resultados obtenidos en el modelo murino indican que la vacunación con biológicos que incluyen en su composición microorganismos Gram negativos inducen la producción de Ac detectables mediante BPA a los 7 días luego de la primera inmunización o bien, tras el refuerzo. Sin embargo, esta respuesta no persiste más allá de los 60 días. Por lo anteriormente expresado, los Ac generados por el empleo de estas vacunas no tendrían un impacto significativo en el diagnóstico de la brucelosis bovina. BIBLIOGRAFIA Bénet, J.J., Massard, C., Garin-Bastuji, B., Moutou, F., Dufour, B., Zygmunt, M.S., Schaeffer, S. and Coton, T., 1991. Réactions sérologiques atypiques dans le dépistage de la brucellose bovine: enquête épidémiologique dans les départements concernés. Epidémiol. Santé Anim. 19, pp. 97?130 1. Bowden R. A. 1996. Brucella. En: Stanchi N.O., Martino P.E., Gentilini E., Reinoso E.H. y Pennimpede E. (eds.) Temas de Microbiología Veterinaria. Ed. Sur., La Plata. 2. Garin-Bastuji B. 1993. Le dépistage de la brucellose des ruminants et ses difficultés. Le cas des sérologies atypiques en brucellose bovine. Point Vét. 152:23-31. 3. Bakos E., Citroni D. Y Galassi J. 1992. Títulos anti-Brucella abortus de origen inusual en toros de raza índica. Vet. Arg. 83:177-181.