Detección de brucelosis canina en dos barrios de la ciudad de Mar del Plata.

M. CLAUSSE; A.G. DÍAZ, M. V. OSES; H. M. ECHEVARRÍA; S. M. ESTEIN

Mercedes, Corrientes

Otro; XVIII Reunión Científico Técnica de la Asociación de Veterinarios de Laboratorio de Diagnóstico; 2010

AAVLD

DETECCIÓN DE BRUCELOSIS CANINA EN DOS BARRIOS DE LA CIUDAD DE MAR DEL PLATA M. Clausse 1,5 ; A.G. Díaz1,4, M. V. Oses 1,3; H. M. Echevarría 2; S. M. Estein1,3 1 Laboratorio de Inmunología. F.C.V. U.N.C.P.B.A., Tandil. 2 Laboratorio de Microbiología Clínica y Experimental. F.C.V. U.N.C.P.B.A. Pinto 399. Tandil (7000). 3 CONICET. 4 CIC. 5 ANPCyT. silmares@vet.unicen.edu.ar INTRODUCCIÓN La brucelosis canina es una enfermedad infectocontagiosa de curso crónico ocasionada por Brucella canis. Se caracteriza por provocar principalmente patologías de tipo reproductivo y osteoarticular. La enfermedad causa grandes pérdidas económicas en criaderos y constituye una zoonosis probablemente subdiagnosticada. Está ampliamente distribuida a nivel mundial con variaciones en la prevalencia del 2 al 30% en distintos países. En Argentina, aunque se han llevado a cabo relevamientos parciales en algunas localidades, se desconoce este porcentaje. El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de brucelosis canina en dos barrios de la ciudad de Mar del Plata con antecedentes de la enfermedad y alto porcentaje de perros con hábitos peridomiciliarios. MATERIALES Y MÉTODOS Para realizar el muestreo se coordinó una campaña de relevamiento con el apoyo de las Asociaciones de Fomento de los barrios Bosque Peralta Ramos y Barrio Jardín Stella Maris, de la ciudad de Mar del Plata. Se muestrearon 72 animales, entre 3 meses y 14 años, que fueron llevados voluntariamente por sus dueños (Tabla 1). El 87,67% de las mascotas tenían hábitos peridomiciliarios (animales que salen del domicilio sin restricciones) y el 8,32%, hábitos domiciliarios (salen supervisados por el dueño). Tabla 1: Distribución de los animales por sexo y raza. Barrio N Machos Hembras Mestizo Raza Mestizo Raza Peralta Ramos 9 13 11 10 43 Jardín 8 4 11 6 29 Total 17 17 22 16 72 Se tomaron muestras de sangre de la vena cefálica antebraquial mediante el empleo de vacutainers con y sin anticoagulante (ACD) para la obtención de sangre entera estéril y suero, respectivamente. Además, se realizó una encuesta a los dueños de las mascotas para recabar información acerca de la procedencia, historia reproductiva y probabilidad de contacto con otros animales (hábitos domiciliarios o peridomiciliarios). Asimismo, se aprovechó la oportunidad para concientizar acerca de la enfermedad y su importancia en la Salud Pública. Las muestras de sangre entera fueron sembradas por duplicado en placas de Agar Tripteína Soya con 0,5 % de extracto de levadura (TSAYE), medio Skirrow (selectivo) y en medio bifásico (botellas con medio sólido selectivo y caldo Brucella). Se incubaron en atmósfera con 5% de CO2 y en aerobiosis. Los cultivos fueron observados durante 21-30 días. Las colonias aisladas se identificaron mediante las pruebas bioquímicas y la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con los ?primers? correspondientes a la secuencia que amplifica la región entre las subunidades 16S y 23S ribosomales de Brucella. Para detectar anticuerpos anti-B. canis, los sueros fueron ensayados en: a) una prueba de aglutinación rápida en placa con la cepa B. canis menos mucoide (M-) inactivada (RSAT) y b) ELISA indirecto contra el extracto salino de B. canis (HS) (IELISA). Ambos antígenos fueron elaborados en el Laboratorio de Inmunología de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional del Centro de la Pcia. de Bs. As. La RSAT se realizó mezclando partes iguales de antígeno y diluciones seriadas de suero en una placa de vidrio, para la determinación del título. Los sueros positivos y sospechosos fueron tratados con 2 mercaptoetanol (2ME) y analizados en RSAT (ME-RSAT) para descartar reacciones inespecíficas. La prueba de IELISA se realizó en placas NUNC Maxisorp sensibilizadas con 0,75 g HS/pocillo. Los sueros y la anti-IgG canina conjugada a peroxidasa se emplearon diluidos 1:100 y 1:1000, respectivamente. El revelado de la reacción se realizó mediante la adición de sustrato (peróxido de hidrógeno) y cromógeno (ABTS) en tampón citrato. La densidad óptica (DO) se determinó en espectrofotómetro (=450 nm) a los 20 min. Se consideraron positivos los sueros con DO superior a 0,70 y sospechosos con DO entre 0,33-0,70. Para detectar anticuerpos anti-especies lisas (S) de Brucella se realizó la prueba de aglutinación con antígeno tamponado (BPA) (Laboratorio Biológico de Tandil). Se contactó a los dueños de los animales positivos y sospechosos para informar los resultados de los análisis y recomendar el tratamiento y/o seguimiento pertinente. RESULTADOS En la población de caninos estudiada, seis animales reaccionaron positivamente a RSAT. Cuatro de los mismos fueron negativos a ME-RSAT, al hemocultivo y sospechosos a IELISA. En este último caso no fue posible repetir la toma de muestra para confirmar o descartar la infección. Los dos animales restantes resultaron positivos a ME-RSAT, IELISA y al aislamiento de B. canis (Tabla 2). Ambos eran machos caninos de raza Doberman, pertenecientes a diferentes dueños del Barrio Peralta Ramos. En uno de ellos se había diagnosticado anteriormente la enfermedad, por este motivo se había castrado y tratado con antibióticos. El otro animal era un macho entero que no presentaba sintomatología. Tabla 2: Resultados de la serología y la bacteriología Positivos Negativos Sospechosos n (%) n (%) n (%) RSAT 6 (8,33%) 66 (91,66%) ME-RSAT 2 (2,77%) 70 (97,23%) IELISA 2 (2,77%) 66 (91,66%) 4 (5,55%) Hemocultivo 2 (2,77%) 70 (97,23%) BPA 0 (0,00%) 72 (100,00%) Todos los perros resultaron negativos a la prueba de BPA por lo cual se descartó la infección con especies lisas del género Brucella. DISCUSIÓN Los resultados del relevamiento concuerdan con la bibliografía y estudios similares. Esta enfermedad puede cursar en forma asintomática y frecuentemente pasa desapercibida. Cabe destacar que la bacteria se acantona en la próstata dificultando la llegada de los antibióticos y su eliminación. Por ello, es importante difundir el diagnóstico serológico como medida de control y la educación sanitaria de la población para prevenir esta zoonosis. BIBLIOGRAFÍA 1. Wanke M.M. 2004. Canine brucellosis. Anim Reprod Science 82: 195-207. 2. Keid L.B. y col. 2007. Diagnosis of canine brucellosis: comparison between serological and microbiological tests and a PCR based on primers to 16S-23S rDNA interspacer.Vet Res Commun. 31:951-65.