Protección contra Brucella ovis en ratones inmunizados con la proteína Omp31 de Brucella melitensis

ESTEIN, S.M. VIZCAÍNO, N. ZYGMUNT, M.S. CLOECKAERT, A. BOWDEN, R.A.

Buenos Aires

Taller; III Taller Internacional de Infecciones por Clamidias, Brucelas y Micobacterias en humanos y animales.; 2000

Asociación Argentina de Zoonosis, F.C.V., UBA. FFyB, UBA

PROTECCIÓN CONTRA Brucella ovis EN RATONES INMUNIZADOS CON LA PROTEÍNA OMP31 DE Brucella melitensis. 1-2Estein, S. M., 3Vizcaíno, N., 4Zygmunt, M. S., 4Cloeckaert A., y 1Bowden, R. A. 1Lab. Inmunoquímica y Biotecnología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Depto. Sanidad Animal y Medicina Preventiva, UNICEN, 7000 Tandil; 2CIC, Bs.As., Argentina; 3Depto. de Microbiología y Genética, Univ. de Salamanca, España y 4Lab. de Pathologie Infectieuse et Immunologie, INRA-Nouzilly, France. (silmares@vet.unicen.edu.ar) Las proteínas de la membrana externa (Omp) de Brucella ovis son antígenos interesantes para una vacuna subcelular contra la epididimitis contagiosa ovina. Ensayos preliminares indican que Omp31 de B. melitensis expresada en la superficie de Escherichia coli protege al ratón contra B. ovis. En este trabajo se estudió: i) la inmunogenicidad (producción de Ac) y la protección conferida por Omp31 extraída a partir de E. coli recombinante ii) el efecto adyuvante del LPS-R. La extracción se realizó suspendiendo las bacterias (E. coli) en una solución de Triton X-114. Las proteínas en la fase detergente se precipitaron en frío con acetona. La expresión y pureza de las proteínas y el LPS-R fue monitoreada mediante SDS-PAGE e immunoblotting con AcM específicos y suero hiperinmune murino anti-E.coli y anti-B. ovis Se inmunizaron ratones (8/grupo) con el extracto de E.coli recombinante enriquecido en Omp31 (Omp31) (20µg/ratón), y el LPS-R purificado de B. ovis (20µg/ratón). Los controles negativos fueron el extracto de la cepa de E.coli carente de Omp31 (extracto control) (20µg/ratón) y solución salina (control de infección). Otros grupos recibieron las mezclas por sonicación de LPS-R+Omp31 y LPS-R+extracto control, conservando la cantidad de antígeno inyectada en los lotes individuales. El control positivo fue el extracto salino de B. ovis (HS). Los animales recibieron dos dosis de antígeno vía i.p., separadas 30 días. La evolución de los anticuerpos fue estudiada mediante ELISA indirecto sobre B. ovis PA76250. El desafío se realizó a los 45 días post-refuerzo con 2x104 UFC/mL, vía i.v. La protección se determinó por conteo de UFC en bazo a los 30 días post-infección. Los resultados se analizaron mediante ANOVA y test de Dunnett. Hubo aumentos significativos de Ac anti-B.ovis a los 37 días de la primoinmunización (p