Cultivo de Ciliados de agua dulce: Optimización de condiciones y técnicas de tinción

MORENO RUIZ HOLGADO M., PERO E., OVIEDO A., ENRICO R., VAN NIEUWENHOVE C Y ALDERETE DE MAJO A.M.

San Miguel de Tucumán

Jornada; IX Jornadas de Comunicaciones de la Facultad de Ciencias Naturales e IML y II Interinstitucionales Facultad-Fundación Miguel Lillo; 2009

Facultad de Ciencias Naturales e IML. UNT.

El objetivo del presente trabajo fue analizar diferentes metodos de colecta, cultivo, técnicas de tinción y realizar preparados permanentes de  ciliados de agua dulce, tema desarrollado como Trabajo Practico para alumnos de primer año, en la materia Biología Celular y de los Microorganismos. Se colectaron muestras de aguas estancadas (floreros, estanques, etc.) seleccionando mediante microscopia aquellas donde se evidenciaba la presencia de microorganismos ciliados y ausencia de rotíferos. Como medio de cultivo esteril se ensayaron dos técnicas en base al agregado de fuentes de energía (avena y polvo de lechuga). Una vez inoculados, se cultivaron a temperatura ambiente durante 7 a 20 días, analizando a intervalos regulares el contenido de ciliados. Para realizar tinciones se utilizaron colorantes vitales (rojo congo y rojo neutro) y azul de metileno y verde de metilo. Con el objetivo de realizar preparaciones permanentes para fines prácticos de la materia los cultivos se fijaron con ácido acético y formol a distintas concentraciones. Los resultados mostraron que en el caso de utilizar polvo de lechuga las principales especies determinadas corresponden a Stylonychia o pulga de agua, mientras que en avena se determinaron más especies de ciliados tipo Paramecium, Halteria, Vorticella, Stentor, Spirostomun y Carchesium como predominantes. Con respecto al tiempo de crecimiento, los cultivos se mantuvieron viables sin la necesidad de repiques por 14 días, luego de los cuales hubo una disminución significativa en el número y/o tamaño de los organismos, a causa del empobrecimiento y la infección de los medios de cultivo. En ese lapso fueron observados ciliados en bipartición y a los 10 días se observaron en conjugación. Los colorantes azul de metilo y rojo congo resultaron mejores para visualizar estructuras celulares (cilios, vacuolas y núcleo) que los otros colorantes empleados. En cuanto a las técnicas de fijación empleadas, se evidenció una fuerte hidrólisis de los microorganismos, aún cuando se usaron soluciones muy diluidas de los fijadores. Nuevos estudios se estan llevando a cabo para optimizar las condiciones de cultivo y la realización de preparados permanentes de ciliados para emplearse con fines practicos durante el cursado de la asignatura.