Estimación del número de células y optimización del método de extracción de pigmentos en cultivos de Nannochloropsis oculata.

BONGIOVANI NATALIA; POPOVICH CECILIA; MARTINEZ, ANA; FREIJE, HUGO; LEONARDI PATRICIA

Bahía Blanca

Jornada; VII Jornadas Nacionales de Ciencias del Mar; 2009

Este trabajo forma parte de una serie de estudios a escala de laboratorio tendientes a determinar las condiciones de crecimiento que optimicen la producción de aceites en una cepa argentina de Nannochloropsis oculata (Eustigmatoyphyceae). Debido a su pequeño tamaño y a la dureza de su pared celular, la obtención de la densidad celular por conteo de células y la extracción de pigmentos suelen representar métodos lentos y poco efectivos. Así, los objetivos específicos de este trabajo fueron: (1) evaluar si la transmitancia (T) in vivo a una longitud de onda elegida, es un buen estimador de la densidad celular y (2) analizar la eficiencia de distintos métodos de extracción de pigmentos en cultivos de N. oculata. Se realizaron ensayos por triplicado con medio de cultivo f/2, a 15ºC, 60 μE.m-2.s-1 y un fotoperíodo de 12:12 h de luz:oscuridad. A partir de cultivos homogeneizados, se prepararon muestras triplicadas obtenidas como réplicas genuinas, se obtuvieron las señales espectrofotométricas usando longitudes de onda de 540 y 750nm y la concentración de pigmentos entre 430 y 750nm. La densidad celular se obtuvo a partir de recuentos con una cámara de Neubauer. Se ensayaron distintos métodos de extracción de clorofila: con distintos solventes (acetona y metanol) y tratamientos (ultrasonido, congelado rápido y descongelado [CRD], y refrigeración por 24 h). La relación lineal entre el log 1/T y la densidad celular fue validada contrastando el número de células de diferentes muestras tomadas al azar, estimado por conteo y a partir del modelo propuesto. Ambos métodos se compararon obteniendo los coeficientes de regresión por minimización de las distancias ortogonales a la recta y realizando una evaluación conjunta de la pendiente y la ordenada al origen. Así, la transmitancia representó una medida in vivo rápida y sencilla para estimar la densidad celular en cultivos de N. oculata, pudiendo reemplazar al método convencional de recuentos celulares. Las muestras tratadas con metanol y sometidas a CRD mostraron mayores concentraciones de clorofila a y pigmentos accesorios que los otros tratamientos, proponiéndose como un método de extracción de pigmentos rápido y efectivo en esta especie.