Extracción y cuantificación espectrofotométrica de clorofila “a” y carotenoides en microalgas marinas.

MARTINEZ, ANA; FREIJE, HUGO; POPOVICH CECILIA; BONGIOVANI NATALIA; LEONARDI, PATRICIA INÉS

Bahía Blanca

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

La extracción y cuantificación de pigmentos, especialmente clorofila “a” y carotenoides se emplea como un método de estimación de la biomasa algal en sistemas acuáticos y en cultivos. La clorofila “a” tiene una estructura cerrada, con un núcleo de magnesio y una larga cola de hidrocarburos hidrofóbicos y es el pigmento fotosintético primario de las algas. Los carotenoides, compuestos de ocho unidades isoprenoides, son esenciales como fotoprotectores de los organismos y se encuentran dentro de las membranas fotosintéticas o en el interior de cuerpos lipídicos, en el estroma del cloroplasto o fuera de él. La diversidad de métodos para la determinación cuantitativa por espectroscopía UV-Visible surge de la combinación del empleo de distintos solventes, tiempos de extracción y métodos de disrupción de la pared celular. Los pasos de todos los procedimientos incluyen: (1) la separación de las células microalgales de la suspensión acuosa (2) la extracción de los pigmentos con solventes orgánicos y (3) la obtención de las señales de Absorbancia del extracto a las longitudes de onda establecidas. En el extracto orgánico se encuentran una mezcla de pigmentos, con picos de máxima absorción alrededor de los 400 nm para los carotenoides y alrededor de los 600 nm los de clorofilas y feopigmentos. Se estimaron las concentraciones de clorofila “a” y carotenoides totales en cepas argentinas de dos especies de microalgas: Nannochloropsis oculata (Eustigmatoyphyceae) y Dunaliella salina (Chlorophyceae), ambas cultivadas en laboratorio bajo condiciones controladas, empleando acetona 90% y metanol absoluto como solventes, 24 horas de tiempo de extracción y dos métodos de disrupción celular: uno empleando la capacidad de lisis del solvente a 4ºC y otro que se basa en la secuencia de congelamiento y descongelamiento. Los resultados indican que las especies se comportan diferente frente a los tratamientos; las medias para cada microalga se compararon por separado, no encontrándose evidencia de diferencias significativas entre los mismos para D. salina. Para N. oculata las diferencias se encuentran entre los solventes resultando ineficientes los sistemas de extracción con acetona 90%. Por otra parte se analizan los resultados que se obtienen con los diferentes algoritmos propuestos por diversos autores, que difieren en los coeficientes que transforman la Absorbancia en concentración pigmentaria y en considerar o no la contribución de los productos de degradación.