LA ADHESIÓN Y POLARIZACIÓN DE CÉLULAS DE HEPATOCARCINOMA CELULAR SON DOS PROCESOS RELACIONADOS

BACIGALUPO M ; MANZI M; CARABIAS P; ELOLA M; MUÑOZ MC; DOMINICI F; RABINOVICH G ; WOLFENSTEIN DE TODEL C

Congreso; LV Reunión Cienfífica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Resultados previos indican que Galectina-1 (Gal-1), una proteína con afinidad por b-galactósidos, promueve la adhesión y la polarización de células de carcinoma hepatocelular, HepG2. Para evaluar si estos efectos son específicos de Gal-1, se investigó el efecto de otra galectina: Gal-3 aumentó el porcentaje de células adheridas (142±10%) pero no tuvo efecto sobre la polarización (determinada como canalículos biliares teñidos con faloidina-TRITC/100 células). Mediante Western blot, se demostró que Gal-1 induce la fosforilación de ERK pero no de Akt mientras que no afecta los niveles de expresión de las proteínas marcadoras de membrana apical, MDR1 y MRP2. Para evaluar si la polarización inducida por Gal-1 es un efecto secundario al aumento de la adhesión o, si por el contrario, los mismos son dos efectos independientes, se permitió la adhesión de las células sobre cubreobjetos durante 4 h y luego a) se agregó Gal-1 recombinante (rGal-1) (7 μM) o b) se transfectó con el siRNA específico (80 nM). Al agregar rGal-1 a las células ya adheridas no se observaron diferencias significativas (134±3%) con respecto al control (en ausencia de rGal-1; 94±15%). Entonces, la presencia de rGal-1 al momento de plaquear las células es necesaria para promover un aumento en la polarización (156±5%). Mediante Western blot, se determinó que los niveles de expresión de Gal-1 disminuyeron significativamente con respecto a los niveles de b-actina (65,70±2,22% y 52,68±6,26%) luego de 48 y 72h respectivamente. El siRNA control no tuvo efecto sobre la expresión de Gal-1. El silenciamiento de Gal-1, 4h después de la adhesión, no produjo diferencias significativas en la polarización (90±5%) respecto a las células transfectadas con el siRNA control (104±15%). En conclusión, nuestros resultados indican que los efectos de Gal-1 sobre la polarización son específicos, secundarios a los efectos sobre la adhesión, involucran la vía de transducción de señales de ERK sin afectar la expresión de MDR1 y MRP2.