Tipificación de Trypanosoma cruzi mediante secuanciación multilocus

PATRICIO DIOSQUE

Huerta Grande, Córdoba, Argentina

Congreso; XXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2006

Sociedad Argentina de Protozoología

La mayoría de los métodos de tipificación de Trypanosoma cruzi actualmente utilizados se basan en la interpretación de corridas electroforéticas de ADN o análisis isoenzimático. En el marco de nuestros trabajos sobre la epidemiología molecular de la Enfermedad de Chagas en áreas rurales de la provincia de Chaco, hemos desarrollado un esquema de tipificación mediante secuenciación multilocus, el cual fue aplicado a 29 clones de T. cruzi, pertenecientes a los tres linajes que circulan en nuestra área de estudio (T. cruzi I, IId y IIe); y a seis cepas de referencia (I, IIa, IIb, IIc, y IId). Se secuenciaron fragmentos de @ 400bp de siete genes metabólicos, incluyendo tres genes de copia única y cuatro que habían mostrado polimorfismo mediante análisis isoenzimático. Se analizaron 2.863 –bp en total para cada clon. Se identificaron 105 sitios polimórficos, 69 de ellos se presentaron en heterocigosis en al menos un clon del parásito. En conjunto los siete loci permitieron identificar 10 perfiles alélicos multilocus o diploid sequence types (DST). Dos de los loci estudiados, independientemente uno de otro, mostraron el mismo poder de resolución que el conjunto de siete loci. Los DSTs identificados concordaron con las identidades filogenéticas determinadas mediante isoenzimas. Sin embargo, el número de subgrupos identificados mediante este esquema de tipificación fue mayor que el obtenido con 16-loci isoenzimáticos y análisis RAPD con seis primers. Estos resultados muestran que la tipificación mediante secuenciación multilocus representa un sistema de tipificación objetivo, una herramienta valiosa para la epidemiología molecular de la Enfermedad de Chagas, y un método apropiado para estudios evolutivos y de genética de poblaciones de T. cruzi. Las secuencias nucleotídicas son fácilmente intercambiables entre laboratorios por vía electrónica, y podría utilizarse como marco de referencia para la evaluación de otros marcadores. Sin embargo, será necesario examinar un mayor número de aislados y de loci para validar este esquema de tipificación.