Tipificación mediante secuenciación multilocus de Trypanosoma cruzi

LAUTHIER JJ, MONJE RUMI MM, RAGONE PG, CARDOZO RM, PÉREZ BRANDÁN CM, BASOMBRÍO MA, DIOSQUE P

Chascomús, Buenos Aires, Argentina

Jornada; XXII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2007

Sociedad Argentina de Protozoología

Las técnicas utilizadas para estudios epidemiológicos de T. cruzi, se basan en análisis visuales de patrones de bandas, que limitan la comparación de los resultados entre laboratorios, y muchas de ellas tienen escasa resolución. Es así que la técnica de secuenciación multilocus de fragmentos de genes metabólicos (MLST, Multilocus Sequence Typing), surge como una nueva y poderosa herramienta de tipificación de microorganismos, que permite además analizar relaciones genéticas intraespecíficas. En el marco de un trabajo que tiene por objetivo desarrollar un esquema MLST para T. cruzi, se evaluaron 3 genes de copia simple. Se diseñaron primers para amplificar fragmentos de entre 400 y 500 bp de cada uno de estos genes. Para evaluar estos primers se utilizaron 13 cepas clonadas, previamente caracterizadas por MLEE, pertenecientes a los linajes T. cruzi I, IId y IIe; y sobre 6 cepas de referencia más un outgroup (T. cruzi marinkellei). Los primers amplificaron exitosamente los fragmentos esperados en todos los casos, los cuales fueron secuenciados y, posteriormente, se evaluó su utilidad para su incorporación al esquema MLST en desarrollo. Los resultados obtenidos sugieren que estos fragmentos, en conjunto con fragmentos de 7 genes evaluados previamente, y de particular utilidad para los estudios epidemiológicos que nuestro grupo lleva a cabo en áreas rurales de la provincia de Chaco.