Efecto de FCCP sobre la interacción de ANS con liposomas de fosfatidilcolina

CUTRO ANDREA; ROVERI OSCAR A.; MONTICH GUILLERMO

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica SAB 2011.; 2011

sociedad argentina de biofísica

El cianuro de carbonilo–(4-trifluorometoxifenilhidrazona) (FCCP), un conocido desacoplante de la fosforilación oxidativa mitocondrial, es un ácido hidrofóbico débil capaz de transportar protones a través de la membrana interna impermeable a los mismos.[1][2] A concentraciones mayores a 1 µM ejerce efectos adicionales sobre el metabolismo energético, los que han sido postulados guardan relación con modificaciones de propiedades eléctricas de la membrana.[3] Previamente hemos informado que FCCP inhibe la unión de 1-anilino-8-naftalen sulfonato (ANS) a liposomas, aumentando la constante de disociación aparente del mismo y disminuyendo la Fmax. Este último efecto fue atribuido a disminución del número de sitios de unión y/o del rendimiento cuántico del ANS unido.[4] Para discriminar entre estas dos últimas posibilidades se determinaron los tiempos de vida de la fluorescencia de ANS unido a liposomas de 1,2-dioleil-sn-glicerol-3-fosfocolina (DOPC). El decaimiento de la fluorescencia pudo ser resuelto como la suma de dos exponenciales: una rápida (1 = 0.59 ± 0.04 ns) correspondiente al ANS libre y una más lenta (2 = 6.48 ± 0.03 ns) atribuible al ANS unido a los liposomas. Este último disminuyó de manera hiperbólica con la [FCCP]. El tiempo de vida estimado para ANS unido a la bicapa fue igual a 3.32 ± 0.32 ns. Resultados similares se obtuvieron con liposomas de 1,2-dioleil-sn-glicerol-3-fosfocolina (DPPC) tanto en fase gel como en fase líquido cristalina. Tanto la Fmax como el tiempo de vida del ANS unido son modificados en un porcentaje similar por FCCP, lo cual indica que éste no modifica de manera significativa el número de sitios de unión de ANS a la bicapa. En resumen, FCCP afecta la unión de ANS a bicapas, disminuyendo la afinidad de ANS por las mismas, y aumentando la polaridad del entorno del ANS unido a la membrana. Referencias: 1. Terada, H., Enviromental Health Perspective 87, 213-218, 1990. 2. Benz, R., McLaughlin, S., Biophys. J. 41, 381-398, 1983. 3. Reyes, J., Benos, D.J. Membrane Biochemistry 5, 243-268, 1984. 4. Cutró, A.C., Roveri, O.A. Biocell 34(Suppl.), 95, 2010. Agradecimientos: Realizado con subsidios de la ANPCyT y CONICET y el apoyo de la Facultad de Ciencias Bioquímicas de la UNR