Caracterización genética por SSCP de hongos micorrícicos arbusculares nativos de la puna argentina

COVACEVICH, F; HERNANDEZ GUIJARRO, K; CRESPO, E; RIVERO MEGA MS; LUGO, MA

Rio Cuarto

Congreso; XXV Congreso Argentino de la Ciencia del Suelo.; 2016

AACS

El objetivo de este trabajo fue analizar la estructura genética de HMA nativos de la Puna argentina a través de estudios de taxonomía clásica combinados con la estrategia PCR-SSCP. En 3 sitios a 3.370 m sobre nivel del mar se recolectaron muestras de suelo compuestas (5 submuestras a 12-20 cm de profundidad) en la Puna, Provincia de Jujuy, camino a Iturbe. Con el objetivo de testear larepresentatividad del área y método de estudio, un sitio fue dividido en tres bloques y las muestras recolectadas y procesadas como independientes. Los HMA se multiplicaron 80 días en cultivos trampa utilizando sorgo y melilotus como plantas hospedantes; las esporas se extrajeron del sustrato por tamizado en húmedo y centrifugación con sacarosa y se identificaron por taxonomíaclásica. Paralelamente se realizó la extracción de ADN del sustrato de los cultivos trampa y se efectuaron dos reacciones de PCR sucesivas, amplificándose en la segunda reacción parte de la región 28S rADN utilizando cebadores específicos para HMA. Los productos de la segunda reacción fueron corridos en electroforesis vertical en un gel no desnaturalizante de MDE. El patrón de bandas del gel SSCP evidenció 25-33 bandas en los sitios estudiados y las muestras recolectadas como réplicas mostraron similar patrón de bandas. Para confirmar la identidad de los HMA, una banda de cada muestra del gel fue cortada, reamplificada y secuenciada. El análisis de taxones por Maximum Parsimonia agrupó, tal como se esperaba, las bandas secuenciadas juntocon representantes del género Funneliformis, permitiendo confirmar la especificidad de los cebadores utilizados. Además, la localización de las bandas se mantuvo separada de los otros géneros de HMA (Acaulospora. Gigaspora, Ambispora y Scutellospora). Los resultados fueron mayoritariamente consistentes con las morfo-especies determinadas, evidenciando la importancia de la combinación de técnicas clásicas y moleculares para estudios de diversidad de HMA.